屋尘螨过敏原转染树突状细胞诱导哮喘小鼠免疫耐受的研究

发布时间：2020-06-27 22:18

【摘要】： 目的:“Th1/Th2偏移”假说是哮喘发病的主要免疫学机制,但近年的研究发现该学说不能完全解释哮喘的免疫学机制异常,提出了哮喘是一种对过敏原免疫耐受缺陷的疾患,其中树突状细胞(DCs)可能是关键的调节因素之一。本实验拟构建尘螨主要变应原基因转染的DCs,研究基因屋尘螨转染DCs诱导哮喘小鼠对致敏抗原的免疫耐受作用和机制。 研究内容: 1、分离小鼠骨髓后体外培养扩增DCs。 2、将屋尘螨主要过敏原Der p1、Der p2真核表达质粒转染DCs,构建过敏原转染DCs,观察过敏原基因转染对DCs表面分子和炎性介质分泌的影响; 3、建立屋尘螨提取液致敏/激发小鼠的肺部变应性炎性模型。 4、观察屋尘螨过敏原转染DCs对小鼠脾脏淋巴细胞中调节性T细胞及肺泡灌洗液中细胞因子、肺组织病理变化的影响。 5、观察清除调节性T细胞对屋尘螨转染DCs作用的影响 方法: 1、分离小鼠骨髓细胞,在含GM-CSF的完全培养基进行培养。以流式细胞仪鉴定培养细胞表面分子CD8α、CD11c、MHC II分子。 2、将携带有屋尘螨主要过敏原Der p1、Der p2的pDs-Der p1、pCIneo-Der p2质粒转化入大肠杆菌DH5α后大量扩增抽提质粒。以Lipofectamine 2000分别将此二质粒转染DCs后,以流式细胞仪检测其细胞表面分子CD40、CD80、CD86、MHC II的变化。采用ELISA方法检测转染后DCs分泌IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ和TGF-β1的变化,采用RT-PCR方法检测Der p1、Der p2在DCs内的表达。 3、用尘螨提取液经腹腔和皮下注射途径致敏C57BL/6小鼠,14天后滴鼻激发,建立尘螨致敏小鼠肺部变应性炎症模型。 4、分离哮喘小鼠和正常小鼠脾脏CD4+T细胞分别加入屋尘螨转染DCs和非转染DCs进行共培养后,检测上清液中IL-4、IL-10、IFN-γ含量的变化,观察屋尘螨转染
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R562.25
【图文】：

图 3：DCs 细胞表面分子表达(单标为 CD8α单标，双标为 CD11c-MHC II讨 论研究中，我们成功地培养了 DCs，且获得的细胞是以未成熟 DC 主胞表面表达丰富的 MHC I、II 类分子及 CD40、CD80、CD86 等多接活化未成熟 CD4+及 CD8+T 淋巴细胞，产生抗原特异性免疫应的 DC 则很少表达上述分子，其主要功能是摄取抗原，在摄取抗原器官，同时自身成熟，然后将所摄取的抗原传递至淋巴细胞。表明，在人和小鼠体内存在着不同的 DC 亚型，包括髓系 DCs 和淋巴为髓系DCs在诱导抗原特异性T细胞反应方面比淋巴系DCs的能量的髓系 DCs 可以通过 GM-CSF 刺激而在体外从骨髓祖细胞中诱研究表明，在培养第 7 天细胞表面表达 CD11c，而 CD8α阴性，并且低，提示所获得的 DC 主要是未成熟 DCs，这与文献报道相符[56，6

图 5：琼脂糖电泳结果染对 DC 细胞因子分泌的影响检测过敏原基因转染对 DCs 作用的影响，我们采用 ELIS Th1、Th2 和调节性细胞因子水平的变化。结果表明，过(Der p1 组和 Der p2 组)分泌 IL-10(p<0.05)、IL-12(p<0.01)、TIL-4、IFN-γ分泌无显著变化。空白对照质粒转染 DC(pDsRe、IFN-γ无明显差异，IL-12、TGF-β1 分泌有所增加(p<0.05原基因转染细胞(p<0.05) ，IL-10 与未转染 DCs 相比无显，IL-10 和 TGF-β1 为调节性细胞因子，均可诱导 Tregs 细 Th2 反应均有调节性作用，TGF-β1 对 Th2 反应有抑制作应有诱导作用。IL-12 为强力的 Th1 反应诱导因子，而 IL

【引证文献】

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1 祁雪萍;小鼠骨髓来源调节性树突状细胞的体外培养和鉴定[D];山西医科大学;2012年

本文编号：2732169