COPD肌萎缩患者股外侧肌PPARa mRNA表达及血清TNFa、IL-8、hsCRP水平研究

发布时间：2020-06-30 04:13

【摘要】： 目的研究过氧化酶体增殖物激活受体a (peroxisome proliferator-activated receptor a, PPARa) mRNA在稳定期的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者股外侧肌中的表达及血清TNFa、IL-8、hsCRP水平,探讨COPD肌萎缩发病机制。方法将30例入选者分为健康组(10例)、COPD骨骼肌萎缩组(10例)、COPD骨骼肌非萎缩组(10例),首先进行肺功能、身体组成、血气分析等检查。再采用ELISA法检测血清中IL-8、TNFa水平,我院生化实验室检测hsCRP水平。最后以针吸活检方法取所有入选者股外侧肌50mg作为标本,通过对实验条件的探讨,建立了实时荧光定量RT-PCR检测方法,检测股外侧肌PPARa mRNA相对表达量。结果1. COPD骨骼肌萎缩患者临床特点：COPD骨骼肌萎缩组较COPD骨骼肌非萎缩组患COPD时间长p0.01)。COPD骨骼肌萎缩组较COPD骨骼肌非萎缩组和健康组体质量、体质量指数、去脂肪质量、去脂肪指数下降(均p＜0.01);COPD骨骼肌萎缩组较健康组脂肪质量、脂肪指数下降(均p0.01)；COPD骨骼肌非萎缩组较健康组体质量指数下降(p0.05)。三组肺功能FEV1%PRE、FEV1/FVC%、FVC%PRE两两比较均有差异(均p0.01),COPD骨骼肌萎缩组较COPD骨骼肌非萎缩组和健康组以上三项均低；COPD骨骼肌非萎缩组较健康组以上三项均低。COPD骨骼肌萎缩组和COPD骨骼肌非萎缩组PO2低与健康组(均p0.01)。 2.血清炎症因子水平：血清CRP三组无差异,三组血清IL-8、TNFa两两比较差异有统计学意义(均p0.01),COPD骨骼肌萎缩组较COPD骨骼肌非萎缩组和健康组血清IL-8、TNFa均升高,COPD骨骼肌非萎缩组较健康组血清IL-8、TNFa均升高。 3.实时荧光定量RT-PCR条件探讨：通过对实验条件的探讨,确定PPARa mRNA和GAPDH实时荧光定量RT-PCR反应体系均为cDNA 3.0μl, TaqDNA聚合酶0.1U/μl,1.0 ul,上下游引物各1.0μl,实时荧光定量试剂(One-step RT-PCR Kit)25μl,总体积50μl。扩增条件：94°C预变性5 min,94°C变性45s,63℃复性45s,72°C延伸45s,33个循环,72℃加时延伸5min。 4. PPARa mRNA表达：股外侧肌PPARa mRNA表达量分别为：健康组0.82±0.15；COPD骨骼肌萎缩组0.44±0.12；COPD骨骼肌非萎缩组0.69±0.14,所有COPD0.56±0.18。COPD骨骼肌萎缩组股外侧肌PPARa mRNA表达量与健康组及COPD骨骼肌非萎缩组比较差异有统计学意义(均p0.01),COPD骨骼肌萎缩组股外侧肌PPARa mRNA表达下降；COPD骨骼肌非萎缩组与健康组股外侧肌PPARa mRNA表达量比较差异无统计学意义p0.05),但较健康组表达呈下降趋势；所有COPD股外侧肌PPARa mRNA表达量与健康组比较差异有统计学意义(p＜0.01),所有COPD股外侧肌PPARa mRNA表达量下降。 5.相关关系：股外侧肌PPARa mRNA表达与FFMI及BMI正相关(r=0.586、r=0.626；p0.01)；与FEV1% PRE及FEV1% FVC正相关(r=0.574、r=0.613：p0.01)；与TNFa及IL-8负相关(r=-0.618、r=-0.690；p0.01)。结论本研究显示COPD合并骨骼肌萎缩的患者具有患COPD年限较长、身体组成发生改变、肺功能下降及慢性低氧血症等临床特点。股外侧肌PPARa mRNA在所有COPD及COPD合并骨骼肌萎缩的患者中表达下降,在COPD骨骼肌非萎缩患者中表达呈下降趋势。血清TNFa、IL-8在COPD骨骼肌萎缩及非萎缩患者中升高。PPARa mRNA表达与FFMI及BMI正相关；与TNFa及IL-8负相关；与FEV1% PRE及FEV1% FVC正相关。综上表明PPARa mRNA表达下调参与了COPD慢性全身炎症反应,不仅累及肺使得肺功能的进一步下降,也可累及骨骼肌导致骨骼肌萎缩的发生,在COPD骨骼肌萎缩中起了重要的作用。
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R563.9
【图文】：

内参,基因,拷贝数,模板

.0BS矛0了560的加书即651075(A)(B)PPARamRNA和GApDH扩增的熔解曲线(A:PPARamRNA，B:GAPDH)4.2.2扩增曲线定量分析的目的基因和内参基因扩增曲线均呈“S”型说明扩增成功，见图根据扩增曲线设置基线后计算出每个样本的Ct值，因Ct值与模板中基因拷的对数成线性关系，所以根据Ct值就可以间接了解模板中基因的拷贝数从目的基因定量。如图3所示内参基因的Ct值为巧，而目的基因的Ct值为明内参基因模板中基因的拷贝数较目的基因大，先进入指数扩增期。图5内参基因和目的基因扩增曲线De胜.Rn粕Cyc!e

【参考文献】