流感嗜血杆菌对离体气管粘膜上皮细胞的作用及细菌感染对COPD患者气道炎症影响的研究

发布时间：2020-07-15 03:25

【摘要】： 目的 探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)与气液界面无血清培养原代兔气管粘膜上皮细胞的相互作用；将该菌作用于原代培养人的气管、支气管粘膜上皮细胞，诱导其分泌和表达前炎症细胞因子并观察其变化；了解上海地区门急诊COPD急性加重期(AECB)患者气道的细菌感染情况，分别比较脓痰组、白粘痰组的痰炎性细胞数与细菌阳性率，并研究AECB患者气道细菌感染对气道炎症的影响。 方法 (1)用低温酶消化法分离兔气管粘膜上皮细胞，无血清培养基及胶原覆盖膜形成的气液界面培养方式培养，使上皮细胞分化成假复层粘膜纤毛上皮细胞，然后加入NTHi感染上皮细胞，24小时后行扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)检查；(2)同上法分离人气管、支气管粘膜上皮细胞(HBEC)，无血清培养基培养细胞融合成片，分别用NTHi、NTHi+红霉素(0.1mg／L)、NTHi+红霉素(10mg／L)、NTHi+庆大霉素(100mg／L)、NTHi+地塞米松(0.1mM)、正常未处理为对照组感染HBEC24h后，ELISA法检测培养上清液中IL-8、TNF-α的水平和免疫组化法检查细胞表达ICAM-1的变化；(3)收集门急诊慢性支气管炎、COPD急性加重期患者159份痰液进行分离培养，并对痰颜色进行评分、炎症细胞计数与细胞分类检查，研究脓痰组、白粘痰组的痰炎性细胞数与细菌阳性率的差异；(4)收集97份取自于97例AECB患者痰，被分为5组，铜绿假单胞菌组、肺炎克雷白杆菌组、流感嗜血杆菌组、副流感嗜血杆菌组和无细菌生长组，15份痰取自于15例正常健康对照组，对痰液进行炎性细胞计数与细胞分类检查，并用ELISA法测定痰上清液中白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素6(IL-6)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。 结果 (1)NTHi感染24h后SEM示气管粘膜上皮细胞表面结构破坏，90％细胞凋亡或死亡，纤毛倒伏、断裂，细菌与非纤毛上皮细胞连接，TEM示细胞表面有较多微绒毛，细菌粘附在细胞表面，伴微绒毛延伸或伪足包绕细菌，将其吞噬至胞内；(2)NTHi能显著诱导HBEC释放IL-8、TNF-α和细胞膜表达ICAM-1，与正常对照组相比(P＜0.001)，0.1mg／L红霉素、庆大霉素组与NTHi组类似显著诱导HBEC释放IL-8、TNF-α和ICAM-1的表达，10mg／L红霉素、地塞米松组抑制IL-8、TNF-α分泌和ICAM-1的表达，尤以地塞米松组为显著；(3)共鉴定出致病菌92株(57.9％)， 省二军医大学不士学位论文 主要为流感嗜血杆菌、肺炎克雷白杆菌、铜绿假单胞菌，159份痰中副流感嗜血杆 菌共57株o5．90），脓痰87份，细菌阳性率为82．7o，白粘痰72份，细菌阳性率 27．8％，两组相比有显著差异沙功力01），脓痰白细胞总数显著高于白粘痰？＜O．001）： K）AECB患者痰中＊｛、IL6、TNF川的水平及中性粒细胞计数显著高于健康对照 组，铜绿假单胞菌组、Hi组、肺炎克雷白杆菌组IL－8、TNF－Q的水平及中性粒细 胞计数均显著高于无细菌生长组，铜绿假单胞菌组和Hi组IL－8、TNF－Q的水平高 于肺炎克雷白杆菌，HP组与无细菌生长组相比IL－8、TNF－a的水平无显著差异， 但中性粒细胞显著升高，AECB患者各组IL6无显著差异。 靴＊）NTHi粘附在上皮细胞表面，通过伪足和微绒毛延伸包绕细菌，将细 菌吞噬在胞内，NTlli对上皮细胞有毒性作用，致上皮细胞变性坏死；＠）HBEC能 分泌IL8和hFk，NTHi作用后显著诱导人气管粘膜上皮细胞分泌和表达前炎症 细胞因子，庆大霉素无抗炎作用，红霉素有抗炎作用，地塞米松有显著抗炎作用：O） AECB患者脓痰中细菌阳性率较白粘痰显著增高，可以作为抗菌药物治疗指征，气 道细菌感染导致中性粒细胞明显增高，痰颜色加深，气道炎症加重；以）AECB患者 气道有Hi、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌感染，其有关气道炎症标志增加，支持 它们在AECB中起着病原学作用。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R563.8
【图文】：

第二军茵又学硕壬学在论丈菌粘附在细胞表面(图1一4，1一5)。TEM示多数上皮细胞凋亡或死亡，细胞表面有较多微绒毛，NTHi粘附在细胞表面，伴微绒毛延伸，有时有伪足包绕NTHi，将其吞噬胞内，部分细菌通过细胞层进人聚碳酸脂膜内，细胞间可见到细菌。(图1一6，1一7)。图1一2正常上皮细胞纤毛sEMX4000图1一3正常上皮细胞sEMX2000图1一4图1一5NTHi感染24h后上皮细胞的结构变

第二军茵又学硕壬学在论丈菌粘附在细胞表面(图1一4，1一5)。TEM示多数上皮细胞凋亡或死亡，细胞表面有较多微绒毛，NTHi粘附在细胞表面，伴微绒毛延伸，有时有伪足包绕NTHi，将其吞噬胞内，部分细菌通过细胞层进人聚碳酸脂膜内，细胞间可见到细菌。(图1一6，1一7)。图1一2正常上皮细胞纤毛sEMX4000图1一3正常上皮细胞sEMX2000图1一4图1一5NTHi感染24h后上皮细胞的结构变

NTHi作用HBEe24h后xZo.一

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 方正,修清玉,罗文侗;慢性阻塞性肺疾病中的流感嗜血杆菌感染[J];第二军医大学学报;1999年09期

2 修清玉,方正,赖国祥,王桂芳,罗文侗,陈吉泉;改良流感嗜血杆菌培养基的实验研究与评价[J];中华医学检验杂志;1998年03期

本文编号：2755913