吸入维生素A与布地奈德对难治性哮喘大鼠肺部病理及TSLP表达的影响

发布时间：2020-07-17 09:30

【摘要】： 目的:通过长期雾化吸入OVA建立大鼠难治性哮喘(Difficult asthma)模型,雾化吸入布地奈德(Budesonide)和维生素A(Vitamin A,VA)作为干预因素,根据支气管-肺、脾病理变化、Western-blotting法及荧光免疫组化法检测肺组织胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)表达,探讨维生素A和布地奈德对难治性哮喘的治疗作用及对肺组织TSLP表达的影响。旨在为临床防治哮喘提供一些有价值的参考。方法:实验第1天将48只成年雌性SD大鼠腹腔注射1ml 0.1%OVA致敏,第8天再次腹腔致敏。第3周起所有动物置于自制的86cm×40cm×40cm纸箱内雾化吸入1%OVA进行激发,每天1次,每次30分钟,共4周。激发后第3周起实验动物随机分成三组:哮喘组、布地奈德组和维生素A组。三组于1%OVA激发后8小时分别进行干预处理:布地奈德组雾化吸入0.02%布地奈德每次30分钟,隔日1次,共3次;维生素A组雾化吸入1250IU/ml维生素A,每次30分钟,隔日1次,共3次;哮喘组雾化吸入90%乙醇,每次30分钟,隔日1次,共3次。激发后第4周、第5周分批处死1/2数量的动物。(1)制作大鼠支气管肺病理切片,显微镜下观察支气管肺病理变化;(2)肺称重后匀浆,提取肺组织总蛋白,Western-blotting法检测肺组织TSLP表达水平;(3)制作肺组织冰冻切片,荧光免疫组化法检测肺组织TSLP表达。结果:(1)组织病理镜检:哮喘组:激发后第4周:气管上皮杯状细胞增多,黏膜下层淋巴细胞浸润增多。肺内气道上皮内杯状细胞增多,周围间质中淋巴细胞(Lymphocyte,LC)和嗜酸性粒细胞(Eosinophil,EOS)中-重度浸润,肺泡隔明显增宽,肺泡腔有红细胞(RBC)、LC渗出。脾脏白髓LC区中度增生。激发后第5周:气管假复层柱状上皮,粘膜结缔组织中浸润LC数量减少。肺间质LC重度浸润,肺泡隔增宽程度有所减轻。脾脏白髓LC区中度增生。维生素A组:激发后第4周:气管假复层上皮,粘膜结缔组织内LC增多。肺气道杯状细胞明显增多,上皮细胞脱落,形成细胞栓,间质EOS和LC重度浸润,肺泡隔明显增宽,隔内LC浸润,肺泡腔较多RBC渗出。脾脏白髓LC区中度增生。激发后第5周:气管假复层上皮,杯状细胞较前减少,粘膜结缔组织内LC减轻,结构大致正常。肺内气道上皮细胞恢复,基底层细胞完整,杯状细胞明显减少,周围间质LC重度浸润,肺泡腔内仅有LC渗出。脾脏白髓LC区增生不明显。布地奈德组:激发后第4周:气管假复层上皮,上皮细胞脱落较少,粘膜层浸润LC较少。肺内气道上皮中杯状细胞明显增多,周围间质中LC浸润较少,肺泡隔增宽。脾脏白髓LC区轻度增生。激发后第5周:肺内气道上皮中杯状细胞明显增多,周围间质LC重度浸润,肺泡隔增宽明显,肺泡腔有LC和RBC渗出。脾脏白髓LC区中度增生。(2)Western-blotting检测结果:激发后第4、5周组间比较均为哮喘组肺组织TSLP表达最高(3454.750±410.715,2985.250±278.534),其次维生素A组(3055.000±307.115,3016.500±342.573),布地奈德组TSLP表达(2658.375±254.289,2297.500±134.481)最少(P＜0.05);同组比较,哮喘组及布地奈德组激发后第5周TSLP表达低于激发后第4周(P＜0.05),而维生素A组无明显变化(P＞0.05)。(3)荧光免疫组化结果:表达TSLP阳性细胞主要分布在肺泡和气道周围间质内。激发后第4、5周组间比较均为哮喘组阳性细胞数目(39.875±4.224,35.375±3.926)(/1013505um~2)高于维生素A组(35.125±2.748,37.875±2.167),布地奈德组(30.875±1.808,28.500±1.927)最少(P＜0.05);同组比较,哮喘组及布地奈德组激发后第5周阳性细胞数目均低于激发后第4周(P＜0.05),而维生素A组激发后第5周高于激发后第4周(P＜0.05)。结论:(1)雾化吸入维生素A对难治性哮喘大鼠肺部病理改变呈双向性调节。能够增加脾脏LC增生,肺LC的浸润,加重炎症反应,又通过减少杯状细胞增生,气道上皮和肺泡上皮结构修复,加快炎症消散速度,缩短病程。(2)难治性哮喘大鼠常伴有激素依赖的表现。布地奈德能够减轻哮喘大鼠肺部炎症细胞浸润,但停药后炎症复燃,病理变化明显加重。(3)布地奈德具有很强的抑制TSLP表达的能力,作用持久。维生素A能够抑制TSLP表达,但作用较弱。TSLP在难治性哮喘肺部表达明显增高,但有时与病情严重程度没有相关性。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R562.25
【图文】：

肺气,杯状细胞,维生素A,箭头

xZ(X)哮喘组激发后第4周，肺内气管上皮杯状细胞增多(白色箭头所示)，猫膜下层淋巴细胞浸润增多(黑色箭头所示)。图2HE染色，x100哮咄组激发后第5周，肺泡隔增宽程度有所减轻，隔内仍有琳巴细胞漫润(黑色箭头所示)，肺泡腔有淋巴细胞、红细胞渗出(白色箭头所示).

肺泡隔,维生素A,增宽,HE染色

气管上皮,杯状细胞,哮喘,箭头

xZ(X)哮喘组激发后第4周，肺内气管上皮杯状细胞增多(白色箭头所示)，猫膜下层淋巴细胞浸润增多(黑色箭头所示)。图2HE染色，x100哮咄组激发后第5周，肺泡隔增宽程度有所减轻，隔内仍有琳巴细胞漫润(黑色箭头所示)，肺泡腔有淋巴细胞、红细胞渗出(白色箭头所示).图3队S染色，xZ(X)维生素A组激发后第4周，肺气道上皮脱落、杯状细胞明显增多，局部增加明图4HE染色，x100维生素A组滋发后第5周，多数肺泡隔增宽程度有所减轻，确内有淋巴细胞浸润

【引证文献】