阻塞性睡眠呼吸暂停综合征和非小细胞肺癌的遗传学研究

发布时间：2020-07-29 19:26

【摘要】： 肥胖及炎症因素均参与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)的发病。白细胞介素-6(IL-6)是肥胖及炎症的重要调节因子之一,且与OSAS发病率增加密切相关。本研究旨在探讨IL-6的遗传变异与OSAS易感性的关系。研究对象为中国华东地区151例OSAS患者及75例健康对照者。通过Haploview 4.1选择了IL-6基因上21kb范围内的5个标签单核苷酸多态性位点(htSNPs)。运用聚合酶链式反应(PCR)扩增上述htSNPs,扩增产物以限制性酶切及凝胶电泳进行基因分型。通过SHEsis程序进行连锁不平衡(LD)分析及单倍型构建。利用回归分析计算优势比(Odd ratios, OR)和95%可信区间(95% confidence intervals, 95% CI),并对性别、年龄和BMI进行校正。研究结果表明:1、上述5个htSNPs位点在OSAS患者及健康对照者中的分布均无差异。2、在非肥胖组(n =117), IL-6单核苷酸多态性位点rs1800796(-572G/C)的G等位基因携带者患OSAS的风险低于C等位基因携带者(OR =0.48; 95% CI, 0.26-0.86; P =0.014);-572G/C多态性的(GG + CG)基因型携带者患OSAS的风险也低于CC基因型携带者(OR =0.38; 95% CI, 0.17-0.88; P =0.008)。3、非肥胖者单倍型TG(rs1880242及rs1800796)携带者患OSAS的风险明显低于其他单倍型携带者(OR =0.39;95% CI,0.20-0.74,P =0.003)。4、非肥胖者睡眠呼吸障碍的严重程度(以AHI表示,次/h)与IL-6 -572G/C的C多态性位点携带率呈线性关系(GG基因型:14.3±5.1,CG基因型:22.0±3.6及CC基因型:34.8±3.5;P =0.012)。本研究结果提示在非肥胖者中,IL-6-572G/C多态性中的CC基因型和C等位基因增加了OSAS患病风险,而GG基因型和G等位基因则对OSAS发病有保护作用。一些单倍型对OSAS的易感性也有影响。本研究在国内外首次揭示了IL-6的遗传变异与OSAS易感性有关。IL-6 SNP基因分型可能成为非肥胖人群睡眠呼吸暂停综合征患病风险的检测方法之一。 IL-6是一种重要的细胞因子,它在免疫应答、细胞生长、增值和凋亡等过程中发挥重要作用。研究表明IL-6及其主要效应物STAT3促进多种癌症的形成,其中包括肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、黑色素瘤及各种血癌。大量数据表明,基因的常见变异可以影响常见疾病的遗传易感性。IL-6基因中存在较多的多态性位点,其中rs1800795 (-174G/C)、rs1800796 (-572C/G)和rs10499563 (-6331T/C)是三个重要的功能性多态位点,它们可以改变IL-6的转录活性,调节IL-6的蛋白表达量,从而影响许多常见疾病的遗传易感性。其中,IL-6 -174G/C和-572C/G多态性与肿瘤易感性的关系一直是学者研究的热点,而-6331T/C多态性与肿瘤易感性的关系至今尚未见报道。为了全面的研究IL-6基因遗传变异与非小细胞肺癌(NSCLC)易感性的关系,我们通过Haploview软件选择了4个单倍型标签单核苷酸多态性位点(haplotype tagging SNP, htSNP)来进行基因分型,它们覆盖了IL-6基因的单倍型区块。这4个htSNP位点多态性通过PCR-限制性酶切片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)的方法对121例NSCLC患者和112例正常对照个体进行基因分型。采用SPSS16.0统计包,利用回归分析对性别、年龄和抽烟史进行校正,我们发现4个htSNP(rs1880242、rs10499563、rs1800796和rs2069837)的基因型及等位基因频率在患者与正常对照中的分布均无显著差异。采用SHEsis程序进行单倍型重构与分析发现,单倍型GTGA在NSCLC病人中的频率明显高于正常对照组(7.2% vs. 1.9%, P =0.004),提示该单倍型显著增加了NSCLC的易感性(OR, 4.50; 95% CI, 1.49-13.53)。我们的研究表明,在汉族人群里IL-6基因区域的常见变异与NSCLC的易感性相关,其作用机制有待进一步研究。第三部分E-cadherin基因甲基化与非小细胞肺癌发生发展的关系 E-cadherin是跨膜糖蛋白家族的一员,在上皮细胞粘附、维持上皮完整性以及细胞分化过程中发挥重要的调节作用。大量的实验数据表明多种上皮癌变过程中可见E-cadherin表达下调或表达缺失。E-cadherin mRNA和蛋白的表达下降也多见于我国的NSCLC患者,但是我们先前的研究发现E-cadherin的基因变异在NSCLC患者中并不常见。这提示我们NSCLC患者中E-cadherin基因的表达减少可能是由于表观遗传学机制而导致的。据此,我们推测E-cadherin基因的甲基化参与了NSCLC的发生、发展过程。我们从35例NSCLC患者的癌组织和癌旁正常组织中提取DNA,并用重亚硫酸盐修饰,并对修饰的DNA直接测序的方法来检测E-cadherin基因5’端CpG岛的甲基化情况。随后,我们采用实时定量PCR(RT-PCR)分析E-cadherin基因的mRNA表达量。甲基化分析显示:28.6%(10/35)的癌组织存在至少一处E-cadherin基因的甲基化,而在与甲基化的癌组织对应的癌旁组织中有60%(6/10)的个体未发现E-cadherin基因的甲基化。这提示我们E-cadherin基因5’端可能存在癌症特异的甲基化位点。RT-PCR结果显示:E-cadherin基因甲基化的10个NSCLC患者中,70%(7/10)的个体癌组织E-cadherin基因mRNA表达量高于对应的癌旁对照组织;在E-cadherin未甲基化的25个NSCLC患者中,64%(16/25)的个体癌组织E-cadherin基因mRNA表达量高于对应的癌旁对照组织。统计分析发现E-cadherin基因的mRNA表达降低与E-cadherin基因5’端的甲基化并无明显相关性。NSCLC中E-cadherin基因的表达下调机制有待进一步研究。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R56;R734.2
【图文】：

电泳图,细胞株,细胞形态,倒置显微镜

NSCLC细胞株在倒置显微镜200×下的细胞形态图片

电泳图,细胞株,电泳图,倒置显微镜

NSCLC细胞株E-cadherin基因MSP电泳图

序列,启动子上游,甲基化,细胞株

3.1.3 NSCLC 细胞株中 E-cadherin 基因去甲基化作用。3.1.3.1 细胞株中 E-cadherin 基因的启动子区域的甲基化位点情况。从测序结果中我们可以发现，在我们所研究的区域中从翻译起始位点到上游启动子区域 227bp 左右共计出现 19 个甲基化特异性位点，分布在-9、-15、-18、-22、-32、-35、-41、-45、-50、-55、-65、-89、-116、-119、-137、-160、-169、-176、-181 处，与 GeneBank 报道的序列完全相符，即在我们所研究的 E-cadherin 基因区域序列上出现的所有甲基化位点可通过设计的通用引物并测序的方法直观显示出来。

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