血管活性肠肽对急性肺损伤时肺内TREM-1表达的影响及其机制

发布时间：2020-08-14 20:47

【摘要】：急性肺损伤(acute lung injury, ALI)及其严重形式急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress'syndrome, ARDS)是多种因素引起的临床常见危重症,而过度炎症反应是导致ALI/ARDS的主要原因,因此,抑制ALI/ARDS早期阶段的“瀑布式”炎症反应可改善ALI/ARDS的预后。髓样细胞表达触发受体-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-1, TREM-1)是表达于巨噬细胞和中粒细胞等髓样细胞表面的免疫球蛋白超家族受体,研究表明TREM-1可放大TLR4介导的免疫应答和炎症反应。血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)是肺内含量最为丰富的神经肽之一。本室前期实验证实VIP可抑制TNF-α等炎症因子的表达而呈现出抑炎特性。VIP对ALI小鼠肺内TREM-1表达有无影响尚未见报道。目的：观察脂多糖(LPS)诱导的ALI小鼠肺内TREM-1的表达及VIP的调控。方法： 1.采用LPS复制ALI小鼠动物模型,RT-PCR法检测肺内TREM-1mRNA表达；气管注射VIP慢病毒观察肺内高表达VIP对ALI时小鼠TREM-1mRNA表达的影响； 2.给予静息状态的小鼠巨噬细胞不同浓度的VIP和不同的作用时间,RT-PCR法检测TREM-1mRNA表达；进一步以LPS应激小鼠巨噬细胞,给予不同浓度的VIP预处理和不同的作用时间,采用RT-PCR法检测TREM-1mRNA表达,流式细胞术检测TREM-1蛋白表达。NF-κB抑制剂PDTC预处理后观察LPS应激的巨噬细胞TREM-1的表达。VIP预处理后Western Blot检测LPS应激的小鼠巨噬细胞中I-κB的含量。结果： 1.VIP对ALI小鼠肺内TREM-1mRNA表达的影响 ALI动物模型复制成功后,采用RT-PCR检测ALI小鼠肺内TREM-1mRNA的表达,结果显示：LPS经腹腔注射6h后即可检测到小鼠肺内TREM-1mRNA的表达显著增加。经气管注射VIP慢病毒观察肺内高表达VIP对ALI小鼠肺内TREM-1mRNA表达的影响,结果显示：与GFP+LPS组相比(0.630±0.039),VIP可降低ALI小鼠肺内TREM-1mRNA的表达(0.531±0.027,P0.05)。 2.VIP对LPS应激的小鼠巨噬细胞TREM-1表达的影响 2.1VIP对静息状态的小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA表达的影响 RT-PCR法检测结果显示：VIP(10-8M)预处理不同时间后(2、4、6、12和24h)或不同浓度的VIP(10-10、10-9、10-8和10-7M)预处理后,小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA的表达均无明显变化(图3,图4,P0.05)。 2.2VIP对LPS应激的小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA表达的影响 RT-PCR检测显示：LPS处理3h后即可检测到小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA表达明显增加(0.062±0.005),且LPS处理6h后达峰值(0.107±0.015,P0.05)。采用不同浓度的LPS(0.04、0.2、1、5和25μg/ml)应激小鼠巨噬细胞,可见随着LPS浓度升高,小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA表达逐渐增加；当LPS浓度为1μg/ml时,小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA表达最高(0.165±0.015,P0.05)。 RT-PCR检测显示：与VIP预处理2hLPS应激的小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA表达(0.364±0.018)相比,VIP(10-8M)预处理6h表达明显减少(0.251±0.008),VIP预处理12h表达最低(0.178±0.006),差异具有统计学意义(P0.05)。采用不同浓度的VIP(10-10、10-9、1098和10-7M)预处理LPS应激的小鼠巨噬细胞,可见随着VIP浓度升高,小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA表达逐渐减少；当VIP浓度为10-7M时,小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA表达最低(0.249±0.010,P0.05)。流式细胞术检测显示：LPS(1μg/ml)可增加小鼠巨噬细胞TREM-1蛋白表达(117.46±6.225,P0.05),而VIP(10-8M)可降低TREM-1蛋白表达(90.89±3.635,P0.05)。 3.VIP抑制LPS应激的小鼠巨噬细胞NF-κB活化 RT-PCR检测结果显示：PDTC可显著性地抑制LPS应激的小鼠巨噬细胞TREM-1mRNA的表达(0.135±0.009,P0.05)。进一步采用Western Blot检测小鼠巨噬细胞中I-κB的含量来反映NF-κB的活化,结果显示：VIP对静息状态的小鼠巨噬细胞中I-κB的表达无明显影响(P0.05)；与LPS处理组(0.186±0.022)相比,VIP+LPS组小鼠巨噬细胞I-κB表达明显增加(0.317±0.034,P0.05)。结论： 1.ALI时小鼠肺内TREM-1表达上调,VIP可降低TREM-1的表达； 2.LPS上调小鼠巨噬细胞TREM-1的表达,VIP可抑制该效应,其机制可能与NF-κB的活化有关。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R563.8

【参考文献】