T-bet基因修饰的树突状细胞对哮喘气道炎症的阻抑作用研究

发布时间：2020-08-16 21:03

【摘要】：哮喘患者存在Th1／Th2免疫反应失衡，以Th2反应为主导致气道炎症。在抗原递呈过程中树突状细胞(DCs)和T细胞所处的细胞因子微环境是决定T细胞Th1／Th2分化方向的关键因素。DCs分泌IL-12与IFN-γ使初始辅助性T细胞向Th1极化。T-bet基因是IFN-γ基因特异性转录因子，可以特异性上调IFN-γ的表达。目前尚无实验证实T-bet基因修饰的DCs能否高分泌IFN-γ。如果T-bet基因修饰的DCs能够高表达IFN-γ，则可以用于提高抗原递呈过程中DCs和T细胞所处细胞因子微环境中的IFN-γ，达到逆转哮喘Th2反应的目的。但目前治疗手段尚不能达到在抗原递呈水平干预T细胞的Th1／Th2分化方向，达到阻抑气道炎症的目的，有关试验研究也未见报道。 基于以上认识，本实验课题旨在研究在抗原递呈水平干预哮喘Th1／Th2分化的哮喘治疗策略的可行性，以及T-bet基因在DCs表达能否促进DCs IFN-γ的分泌以及高分泌IFN-γ的T-bet基因修饰的DCs能否逆转哮喘Th2反应，从而阻抑哮喘气道炎症的发生和发展。本实验课题以RT-PCR方法获得小鼠T-bet基因，以基因工程方法构建了小鼠T-bet重组腺病毒载体，以293A细胞包装获得了T-bet重组腺病毒。同时，以重组细胞因子mGM-CSF、mIL-4从小鼠骨髓单个核细胞诱导培养获得了小鼠树突状细胞。然后以T-bet重组腺病毒转染小鼠树突状细胞获得了T-bet基因修饰的树突状细胞。以ELISA方法检测T-bet基因修饰的树突状细胞可以高表达IFN-γ。最后，通过将T-bet基因修饰的树突状细胞经静脉注射注入OVA致敏的小鼠体内，以ELISA检测小鼠血浆IFN-γ和IL-4表达水平分别代表体内Th1和Th2反应，以流式细胞术检测小鼠外周血Th1／Th2细胞亚群，气道炎症用病理切片HE染色确定，经气道炎症阻抑试验和气道炎症逆转试验结果显示，哮喘模型小鼠存在Th1／Th2反应失衡，为Th2优势反应。T-bet基因修饰的树突状细胞注射后小鼠血浆IFN-γ升高，IL-4降低，小鼠转为以Th1反应为主，并且气道炎症完全消失同正常小鼠。
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R562.25
【图文】：

学博士学位论文·刘国梁·B01013第一部分·材料材料与方法~S1I”l实验材料物6、8周雌性小鼠。购于中国医学科学院实验动物繁殖中心。载体质粒、宿主菌株杆菌菌株E.。oliDI压5山公司BDAdello一狠腺病毒载体系统;pshu川eZV留tor质粒，图谱及多克隆位点见图1;

BD胡.阴卜X翔胶病毒DNA图谱

b)BDA山姐o-x脚腺病毒病毒DNA图谱见图2;图2BD胡.阴卜X翔胶病毒DNA图谱3.丙EM.TEa叮载体而m铭a公司，载体图谱见图3图3沁EM.TE娜载体图谱三、引物引物设计参考文献口]发表的序列及表达载体DBA么泊。一MT腺病毒载体多克隆位点，应用巧imerPrimesr.0软件设计，由华美公司合成。两引物间扩增片段约长1690饰。

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 唐小云;姬云丽;杨美荣;聂影;桂金秋;刘亚威;李福娟;;妊娠特异性糖蛋白对人外周血树突状细胞的免疫调节作用[J];热带医学杂志;2011年06期

2 刘爱平;杨瑜;张晓燕;;不同亚型树突状细胞与HIV-1相互作用的研究进展[J];中国免疫学杂志;2011年09期

3 陈新年;孔评石;夏惠;;间日疟原虫可溶性抗原对树突状细胞成熟的影响[J];检验医学与临床;2011年12期

4 黄红艳;王营;陈复兴;刘军权;周忠海;张娟;;姜黄素诱导的免疫耐受性人树突状细胞的研究[J];中国免疫学杂志;2011年07期

5 王琦;曾学军;;树突状细胞在类风湿关节炎中的研究进展[J];基础医学与临床;2011年08期

6 许惠惠;阮嫣峗;颜卫华;林爱芬;;HLA-G诱导DC细胞在免疫耐受机制中的研究进展[J];生命科学;2011年08期

7 杨文博;赵X;;树突状细胞的研究进展[J];医学综述;2011年15期

8 符雪莲;;蛋白酶体抑制剂硼替佐米对小鼠树突状细胞的免疫调节作用研究分析[J];吉林医学;2011年21期

9 陈环球;姚宇锋;赖娅娜;郑苏文;;恶性黑色素瘤术后自体DC疫苗辅助治疗的临床疗效[J];江苏医药;2011年14期

10 姜晓峰;郭大伟;崔哲铭;朱磊;孙文郁;林琳;唐裕福;王学范;梁健;;阻断CD40-CD40配体共刺激信号诱导的移植免疫耐受对树突状细胞的影响[J];中国免疫学杂志;2011年09期

相关会议论文 前10条

1 刘修恒;;小鼠骨髓源性不同成熟度树突状细胞培养鉴定[A];第十七届全国泌尿外科学术会议论文汇编[C];2010年

2 张庆红;胡玉珍;吕顺艳;钟延清;;雌激素影响大鼠树突状细胞的分化、成熟和功能[A];中国生理学会第六届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2003年

3 郭大伟;梁健;姜晓峰;王学范;魏云涛;姜洪磊;;GPC3基因转染的树突状细胞诱导抗肝癌HepG2细胞杀伤作用的研究[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年

4 张新华;钟翠平;顾云娣;顾晓;范强;王国强;周播江;;TGF-β1基因转染树突状细胞增强移植心脏耐受性并降低Fractalkine的表达[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

5 于益芝;刘书逊;王文雅;张明徽;郭振红;徐红梅;齐润姿;安华章;曹雪涛;;TRAIL在树突状细胞杀伤活化T细胞中的作用[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

6 尤长宣;罗荣城;张军一;苏瑾;廖旺军;郑航;Paul L Hermonat;;基因转移制备树突状细胞的实验研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年

7 葛长勇;李鸿钧;孙茂盛;冯婷婷;靳昌忠;姚航平;吴南屏;;灭活SV40致敏的猴树突状细胞的生物学特性研究[A];2008年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2008年

8 葛长勇;李鸿钧;谢天宏;张光明;易山;孙茂盛;吴南屏;;恒河猴树突状细胞的生物学特性研究[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年

9 张尧;靳风烁;兰卫华;李彦峰;张克勤;吴刚;叶锦;;联合应用塞莱西布和CpG-ODN对树突状细胞功能的影响[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

10 夏强;刘卫彬;陈振光;张莹;黄如训;;胸腺成熟树突状细胞与重症肌无力发生的相关性分析[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前10条

1 章静波;干细胞研究新动向[N];健康报;2009年

2 王雪飞;树突状细胞“面目”更清晰[N];健康报;2004年

3 记者 白毅;间充质干细胞可促进成熟树突状细胞增殖分化[N];中国医药报;2009年

4 刘伯宁;乔布斯的错误与斯坦曼的自我试验[N];南方周末;2011年

5 方彤;树突状细胞瘤苗新进展[N];健康报;2006年

6 本报记者 沈湫莎;这一次,诺奖会不会颁给逝者[N];文汇报;2011年

7 张献怀;树突状细胞疗法治疗恶性黑色素瘤[N];中国医药报;2004年

8 记者　毛黎;美发现一种“超级”形态酶[N];科技日报;2006年

9 杨淑娟;美研究出新型丙型肝炎疫苗[N];中国医药报;2006年

10 ;慢性HBV感染使树突状细胞功能受损[N];中国医药报;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 潘建平;γ-干扰素对树突状细胞分化和功能成熟的调控及其基因修饰的树突状细胞抗肿瘤免疫机制研究[D];浙江大学;2002年

2 朱伟国;PPAR-γ激动剂吡格列酮抑制血管紧张素Ⅱ诱导树突状细胞免疫激活致动脉粥样硬化斑块不稳定的研究[D];浙江大学;2010年

3 王正昕;肿瘤微环境中浸润性树突状细胞的表型和免疫学功能的研究及其临床意义[D];第二军医大学;2000年

4 周向阳;新型热休克蛋白HSP-DC激活树突状细胞及其佐剂效应研究[D];第二军医大学;2003年

5 赵鸿;未成熟树突状细胞联合骨髓移植诱导大鼠异体肾移植免疫耐受的研究[D];复旦大学;2003年

6 陈玉丙;树突状细胞抗原负载及MAGE-3 DNA瘤苗研制[D];吉林大学;2004年

7 王宏伟;肺间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的免疫激活与免疫耐受作用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年

8 赵毅;青藤碱对RA患者树突状细胞免疫功能的影响及机制研究[D];第一军医大学;2007年

9 刘海波;Fas信号激活树突状细胞炎性复合体形成的生物学意义与分子机制研究[D];第二军医大学;2010年

10 赵娟;受者来源的PIR-B转染的树突状细胞对小鼠异基因骨髓移植GVHD的保护作用[D];华中科技大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 吴鸣宇;黑色素瘤基因（MAGE-1）相关肽负载树突状细胞对肝癌细胞杀伤作用的实验研究[D];苏州大学;2003年

2 茹颖;树突状细胞在IgA肾病和系统性红斑狼疮发病机制中的作用[D];北京协和医学院;2011年

3 孟冬梅;急性髓细胞白血病细胞来源的树突状细胞的诱导及功能研究[D];青岛大学;2003年

4 梁军利;IFN-β1a对多发性硬化树突状细胞分泌的细胞因子影响的研究[D];广西医科大学;2010年

5 黄祺琦;耐受性树突状细胞来源的exosome治疗小鼠免疫介导性再生障碍性贫血的实验研究[D];南昌大学;2010年

6 初晓霞;淋巴瘤树突状细胞的表达与临床分期、恶性度及预后的相关性研究[D];青岛大学;2002年

7 刘丽燕;MyD88在OK-432诱导树突状细胞成熟中的作用[D];福建医科大学;2010年

8 孟松;IL-10处理的树突状细胞分泌的exosomes对实验性大鼠肠炎的治疗作用[D];南京医科大学;2010年

9 王茜;调节性树突状细胞对CD8~+T细胞的负向调节作用[D];泰山医学院;2010年

10 郭佳;TLR配体诱导骨髓来源树突状细胞获得产生全反式维甲酸的能力[D];浙江大学;2011年

本文编号：2794942