小鼠β防御素-6的克隆和鉴定、小鼠β防御素-4、6以及人β防御素-3在肺组织中的表达研究

发布时间：2020-08-16 19:59

【摘要】：目的 (1) 从小鼠肺组织里克隆mBD-6的cDNA。(2) 观察肺组织中小鼠β-防御素-4、6的基因表达水平,探讨mBD-4、6在急性肺损伤发生发展中的作用。(3) 研究小鼠β-防御素4、6在乳鼠和成年鼠肺部的表达和调控情况。(4) 建立检测hBD-3 mRNA表达水平的实时荧光定量PCR方法,对肺癌患者的癌组织、正常肺组织进行检测,从mRNA转录水平分析hBD-3基因在肺癌的表达,以便用于进行其与肺癌的关联性的探讨。 方法 (1) 提取大肠杆菌内毒素腹腔注射后小鼠肺组织的总RNA,反转录为cDNA作为模板,采用PCR的方法克隆小鼠β防御素-6基因。PCR产物连接入pGEM-EAST载体,转化JM109感受态细胞,蓝白筛选,对PCR鉴定含有目的片段的克隆进行测序。(2) 将成年小鼠随机分为两组,一组为急性肺损伤组,一组为对照组。用大肠杆菌内毒素腹腔注射复制急性肺损伤模型,于不同时间点处死小鼠,采用Trizol法提取肺组织总RNA,实时荧光定量RCR检测肺组织beta-防御素-4、6基因在不同时间点的表达水平,测序鉴定PCR产物的特异性。(3) 乳鼠与成年鼠各一组,用大肠杆菌内毒素腹腔注射两组小鼠,于不同时间点处死小鼠,采用Trizol法提取肺组织总RNA,实时荧光定量PCR检测肺组织beta-防御素-4、6基因在不同时间点的表达水平。(4)应用SYBR Green Ⅰ荧光定量技术,利用GAPDH作参照,建立检测hBD-3 mRNA的实时荧光定量逆转录FQ-PCR方法,并检测13份正常肺组织和16份肺癌组织标本hBD-3 mRNA的表达水平。 结果 (1) 获得预期大小的PCR产物,经序列鉴定证实为小鼠β防御素-6基因。(2) 病理结果证实ALI动物模型复制成功。对照组肺组织中各时间点及ALI组6h点均无β-防御素-4、6基因表达。而ALI组12h、1d、3d时表达显著升高。(3) 小鼠β-防御素-4、6mRNA在LPS刺激12h后的幼鼠和成年鼠肺组织中均有表达,荧光定量证实乳鼠LPS刺激后不同时间点肺组织β-
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R563
【图文】：

克隆平板

oB卜6质粒DNA的测序结果

mB卜4、6和p一aetin

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本文编号：2794872