荧光定量PCR检测社区获得性肺炎患者咽拭和痰标本肺炎支原体的研究

发布时间：2020-08-16 19:07

【摘要】： 目的：社区获得性肺炎(CAP)的病原学研究一直是重要课题,由于技术方法问题病原学诊断多是回顾性,因而治疗仍以经验用药为主,但首次经验用药失败率因耐药菌株和非典型病原体感染率增加而明显增加,所以临床需要快速病原学诊断方法以指导早期准确用药。肺炎支原体(MP)是社区获得性肺炎重要病原体,所占比例大约10-30%,并呈持续增加的趋势,甚至与肺炎链球菌发生率相当,两者在CAP病原体中所占比例接近50%。目前应用最广泛的β内酰胺类抗生素对肺炎支原体无效,大环内酯类和喹诺酮类虽然对肺炎支原体敏感,然而在亚洲地区肺炎链球菌对大环内酯类耐药率非常高,超过50%,而耐喹诺酮的肺炎链球菌和流感嗜血杆菌比例也在增加,因此,如果能准确快速诊断,选择抗生素将更有针对性,临床效果更佳。 肺炎支原体传统诊断方法主要是血清学—IgM或IgG双份血清滴度升高4倍为诊断标准,多用于回顾性诊断,且诊断特异性和敏感性易受免疫力低下和近期患肺炎支原体感染影响,所以需要一个快速诊断方法。分子生物学是近十几年来发展最迅速学科之一,其核酸扩增技术非常成熟,已应用于肺炎支原体诊断。聚合酶链反应(PCR)就是其中之一,如今在传统PCR技术上出现了更先进PCR技术,如荧光定量PCR,荧光定量PCR是集PCR高敏感性、DNA杂交探针的高特异性和光谱技术的高精确定量为一体,它一般2小时内出结果,为临床早诊断早治疗提供帮助。本实验采用荧光定量PCR对社区获得性肺炎病人的痰和咽拭标本进行肺炎支原体检测,其中咽拭为双份(急性期和恢复期),并且以上皮细胞在低倍镜下数量为基准进行定量分析,以探讨咽拭和痰标本在荧光定量PCR检测肺炎支原体是否存在差别,同时也比较两份咽拭核酸含量变化,并结合临床进一步分析咽拭和痰标本对荧光定量PCR检测肺炎 2009年5月——2010年1月入住我院呼吸科50例社区获得性肺炎病人(诊断标准参考2006年我国CAP指南标准),其中男24例,女26例,年龄15-82岁。性别比例无差别,48例入院前应用抗生素。对照组：男14例,女13例,年龄19-75岁,近3个月无下呼吸道感染的健康志愿者。 1.咽拭：入院和出院前两份,用无菌拭子擦拭咽后壁,然后浸入1ml无菌生理盐水搅并用力挤压管壁,低倍镜下计数并记录,保存-80度冰箱用以PCR检测。 2.痰：收集入院时痰标本,低倍镜检是否合格,保存-80度冰箱待检。 3.对照组只采取咳出的呼吸道分泌物,保存-80度冰箱待检。 咽拭按试剂盒说明进行操作,患者痰及健康组呼吸道分泌物先用4%氢氧化钠消化,而后按试剂盒说明操作。 急性期咽拭49例,阳性率73.5%；恢复期咽拭22例,阳性率54.5%统计处理配对资料t检验,两者差别有显著性p=0.044 痰荧光定量PCR检测24例,阳性率100%,痰与急性咽拭比较独立样本t检验,p=0.051. 三、对照组MP阳性率26.9%,MP感染患者定义为痰DNA大于等于107copies/ml,CAP患者MP感染率为51%。 一、恢复期咽拭较急性期咽拭肺炎支原体量减少。 二、咽拭较痰标本MP含量低,检出率低。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R563.1
【图文】：

认为具有统计学差异。结果扩增曲线(见图l)为标准品与样本荧光定量PcR扩增曲线，横坐标为开始上升的循环数，即CT值，纵坐标为荧光值，各曲线的起始、上升、平台期非常明显。标准曲线(见图2)4个标准品浓度依次相差10倍，分别为sxlo4、5、105、sxlo6、sxlo7，曲线r=一1.00，斜率一3.204，截距45.10，符合试剂盒要求。

扩增曲线(见图l)为标准品与样本荧光定量PcR扩增曲线，横坐标为开始上升的循环数，即CT值，纵坐标为荧光值，各曲线的起始、上升、平台期非常明显。标准曲线(见图2)4个标准品浓度依次相差10倍，分别为sxlo4、5、105、sxlo6、sxlo7，曲线r=一1.00，斜率一3.204，截距45.10，符合试剂盒要求。扩增循环数(CT值)图1.荧光定量PCR扩增曲线。礴

本文编号：2794822