结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖的提纯及血清学诊断应用

发布时间：2020-08-22 11:27

【摘要】：目的:提取纯化结核分枝杆菌( MTB )脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomanan,LAM)抗原,并探讨其在肺结核血清学诊断中的应用价值。 Q方法:MTB菌体经氯仿甲醇混合液脱脂、超声破碎、乙醇回流1h处理后,去除蛋白、脂质、核酸,得到粗制的脂多糖。此脂多糖经Sephacryl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。以该LAM作为包被抗原,建立LAM抗体(LAM-IgG)检测的酶联免疫吸附测定法(即ELISA法)和免疫金渗滤法(DIGFA),并将其用于肺结核和对照血清的LAM抗体检测。 结果:从1.89g干重菌体中,获得6mg的LAM,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后硝酸银染色,在大约37kDa处呈现条带,与对照标准品大小一致。以此LAM作为包被抗原,用ELISA法检测117例肺结核患者(包括涂阳和涂阴),92例非结核肺部疾病患者、188例健康体检者,敏感性71.3%,特异性93.9%;用免疫金渗滤法检测了192例涂阳肺结核患者、46例非结核肺部疾病患者、68例健康体检者血清的LAM抗体,敏感性91.7%,特异性87.8%; 结论:成功提取到LAM抗原,此抗原可作为酶联免疫吸附法和免疫金渗滤法的包被抗原,用于肺结核的血清学诊断。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R521
【图文】：

称取牛血清白蛋白，先配制浓度为1 mg/mL的母液，然后以母液稀释5 mg/mL，0.4 mg/mL，0.3 mg/mL，0.2 mg/mL，0.1 mg/mL），然后与液反应3 min后在OD=595 nm的波长处测定吸光度。白调零后，以吸光度为纵坐标，蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线，品与考马斯亮蓝染色液反应。通过吸光度读数，带入回归方程来确定其结 果0、OD260 监测结果收集 144 管收集夜，从 A1 到 L12。从 AKTAdesign 系统上得到监测（如图一）。在 B6 到 C2 之间、E6 到 E12 之间各有一个吸收峰。由此有蛋白或者样品本身含有共轭双键的脂肪酸。而 OD260 的监测图为样品中没有核酸。

图 2 苯酚-硫酸法跟踪糖浓度斯亮蓝染色结果染色未见明显条带，只有蛋白 Marker 的银染色结果后，呈现一个与标准品大小一致均一的亮较单一，颜色上比对照标准品亮，与蛋 37Kd。又鉴于 OD280 的吸收峰，故推测的复合物，多糖是主要成分，与文献报道

图 3 SDS-GAGE 电泳硝酸银染色法 分析结果 blot 分析，未见明显条带，重复三次，皆 CS-35 和 CS-41，在海关常温下滞留时间达结果色法，测定标准品中蛋白的含量为 15μg/ m斯亮蓝未见明显条带相符。蛋白含量所对应表 1 标准蛋白含量所对应的吸光值mL） 0．5 0．4 0．3 0．2 AM 样品 2. 对照标准品 3. 标准蛋白

【参考文献】

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1 付桂明,刘成梅,涂宗财;茶树菇水溶性多糖的分离纯化和化学组成的研究[J];食品科学;2005年09期

2 孔忠顺,管波清,古淑香,马s

本文编号：2800629