白介素-6、白藜芦醇对肺泡上皮细胞A549增殖的影响

发布时间：2020-09-30 18:51

　　目的：研究白介素-6(interleukin-6，IL-6)、白藜芦醇(resveratrol，Res)对肺泡上皮细胞A549增殖的影响，观察其对内毒素(endotoxin，LPS)诱导的A549细胞损伤中的干预作用。探讨白藜芦醇诱导A549细胞凋亡的机制，并构建A549细胞白介素-6 RNA干扰模型。方法：本实验通过A549细胞培养，按预设方案添加白介素-6、白藜芦醇、内毒素处理细胞样品；采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测A549细胞的增殖效应及不同药物对其增殖效应的影响；运用TUNEL染色检测白藜芦醇诱导的A549细胞凋亡；运用蛋白免疫印迹技术(Western blotting)检测A549细胞凋亡相关蛋白的表达变化；化学合成法合成白介素-6 SiRNA，通过脂质体转染干扰A549细胞白介素-6的表达；运用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测A549细胞内IL-6的表达及LPS刺激后的变化。结果： 1．内毒素能损伤体外培养的A549细胞，其作用具有明显的时间、浓度依赖性；外源性白介素-6对内毒素诱导的A549细胞损伤的干预作用不明显。 2．白藜芦醇对内毒素诱导的A549细胞损伤的干预作用不明显。白藜芦醇对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用，这种作用具有明显的时间、浓度依赖性。白藜芦醇对A549细胞的增殖抑制作用部分是通过诱导A549细胞凋亡而实现的。白藜芦醇诱导A549细胞凋亡可能是通过抑制Akt的表达及其磷酸化，从而调节线粒体凋亡途径相关蛋白的表达而实现的，其对死亡受体途径的相关蛋白影响不明显。 3．体外培养的A549细胞存在白介素-6基因的表达，内毒素刺激A549细胞能导致其表达量的变化，通过脂质体转染的白介素-6 SiRNA能干扰A549细胞中白介素-6的表达。结论：外源性的白介素-6和白藜芦醇对内毒素诱导的A549细胞损伤的干预作用不明显；白藜芦醇对A549细胞存在明显的增殖抑制作用，能够通过调节凋亡相关蛋白的表达诱导A549细胞凋亡；体外培养的A549细胞能表达白介素-6，内毒素能诱导其表达量的变化，并成功构建了白介素-6 SiRNA。
【学位单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2007
【中图分类】：R563
【部分图文】：

白黎芦醇,浓度,单因素方差分析,时间依赖性

渐上升(见图l一3)。30、60、90林mol几白黎芦醇处理A549细胞24、45、72h后的OD值随作用时间逐渐下降(见表1一5)，相应的细胞生长抑制率逐渐上升(见图1一4)。经单因素方差分析，以上各组OD值、细胞抑制率之间有显著差异(P<0.01)。以上结果表明白黎芦醇对人肺癌A549细胞有较强的增殖抑制作用，而且这种作用有明显的浓度、时间依赖性。表1一1不同浓度LPS处理A549细胞24h后OD值的变化(又士s)浓度(mg/L)OD值 2.360士 0.1672.015士 0.2141.582士 0.1781.124士 0.1850.995士0.157注:以上各浓度组A549细胞的吸光值之间均有显著性差异 (p<0.01) 11100「「 8880卜卜易易60卜*__」」七七已一比多夯么到不夕多;;州州母母40卜*阶努价到陇捻捻材材 2220卜一肠扮弥么胳拔叼贬么论拢么么 OOO‘esesesesesesesesesesesesesesesJ一』z‘自2若 desss 00015102000浓浓度(叱 /L)))图1一1不同浓度LPs对A549细胞的增殖抑制作用(*p<0

抑制率,药物,日量,白黎芦醇

00061224487222时时间 (h)))图1一 2LPs处理A549细胞后生长抑制率随时间的变化(*p<0.01)表1一 3IL一6、白黎芦醇对LPS刺激A549细胞损伤的干预作用(24h)(见士s)IL一6ReS正常对照组模型组干预组 2.351士0.181 1.132士0.124 1.241士0.251八 1.086士0.107八 1.134士0.097八 2.197士0.204* 2.218士0.157* 2.214士0.267* 2.257士0.351 1.114士0.098高剂量组中剂量组低剂量组高剂量组中剂量组低齐日量组 1.009士0.103 0.989士O一099 1.105士0.107八八八八△△药物对照组 1.407士0.124** 1.561士0.141** 1.687士0.201**注:干预组，J模型组相比无差异(△p一住679>0.05、△△p一住370>0.05);药物对照组与正常对照组IL一6无明显差异(*p二0.786>0.05)，白莹芦醇有显著差异(**p=0.008<0.01)

白黎芦醇,药物,日量,干预作用

【参考文献】