慢性阻塞性肺病患者痰液菌群结构分析

发布时间：2020-10-10 21:29

　　 目的：通过分析慢性阻塞性肺病患者痰液菌群结构改变情况，初步探讨痰液菌群改变与COPD发生、发展的关系，以期为临床COPD的预防、诊断及治疗过程中引入呼吸道菌群这一新的靶标提供依据，为呼吸系统疾病的个体化治疗开拓思路。 方法：按照痰液细菌学检验的标准化操作程序收集临床COPD患者痰液样本，提取样本中全部细菌总DNA，通过PCR技术，选用通用引物扩增样品中全部细菌16S rRNA基因。将扩增产物通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)分离，获得痰液细菌种属结构图谱，对有意义的DNA条带进行切胶并克隆测序。利用Real-time PCR定量分析COPD患者痰液肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）的变化。 结果：COPD组与健康人群组痰液细菌DGGE图谱有明显差异(P 0.05)。Real-time PCR结果显示：与正常组相比，COPD组中铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和肺炎链球菌的数量均显著增加(P 0.05)。 结论：DGGE和Real-time PCR技术联合应用有助于评估慢性阻塞性肺病患者呼吸道菌群结构改变状况。COPD患者痰液菌群结构及特定细菌数量较之正常人群发生显著性改变。提示COPD患者痰液菌群结构改变可能与慢性阻塞性肺病的发生、发展有一定关联。
【学位单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2014
【中图分类】：R563.9
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
材料与方法
    1. 实验材料
        1.1 样品收集
        1.2 载体和菌株
        1.3 主要仪器
        1.4 主要试剂
        1.5 实验相关溶液配方
    2. 实验方法
        2.1 细菌总 DNA 的提取
        2.2 PCR 扩增
        2.3 DGGE 电泳
        2.4 DGGE 图谱分析
        2.5 克隆测序
        2.6 Real-time PCR
        2.7 统计学处理
结果
    3.1 PCR 对 16S rRNA 基因的扩增
    3.2 对 DGGE 图谱进行相似性聚类分析
    3.3 克隆测序结果
    3.4 Real-time PCR 的定量分析
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
附录
攻读学位期间发表文章情况
致谢


本文编号：2835615