JNK信号转导通路在高氧肺损伤中的作用

发布时间：2020-10-11 04:46

　　 目的高氧机械通气治疗是临床中抢救危重病人最有效的方法之一,然而长时间持续吸入高浓度氧可导致肺氧化应激性损伤,目前对高氧肺损伤的发病机制尚未完全清楚,因而临床上尚无确定有效的防治方法。高氧肺损伤的一个重要组织学特点是细胞凋亡。c-Jun氨基末端激酶(C-Jun NH2-terminal kinase ,JNK)信号转导通路是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPKs)家族中的重要通路之一,对细胞的凋亡调节发挥着重要作用。本课题采用幼鼠建立高氧肺损伤动物模型,观察高氧下肺组织细胞凋亡及JNK信号转导通路激活的时空分布特征,并探讨JNK信号通路对高氧诱导的肺细胞凋亡的影响,从而研究JNK信号转导通路在高氧肺损伤中的作用。 方法3周Wistar大鼠48只采用随机图标法分为6组,每组8只:空气对照组、高氧暴露3天组、高氧暴露7天组、高氧暴露14天组、空气+SP600125干预组、高氧暴露7天+SP600125干预组。高氧组持续吸入高浓度氧(O295%),空气对照组置于室内空气中(O2≈21%)。SP600125干预组动物经腹腔注射SP600125 30mg/kg,2h后再予高氧或空气暴露。采用肉眼及苏木精和伊红(Hematoxylin and eosin ,HE)染色光镜下观察肺组织病理学变化,末端标记法( Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)分析肺组织细胞凋亡的变化,免疫组化检测肺组织磷酸化-JNK(p-JNK)的表达和分布,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肺组织p-JNK蛋白质的含量。 结果肺组织病理学改变表现为高氧3天时肺组织充血、水肿、出血和炎性细胞浸润,高氧7天时上述改变更加明显,高氧14天时则肺组织充血水肿减轻,间质增厚,成纤维细胞增生明显。TUNEL分析表明空气对照组肺组织中少见凋亡细胞,而高氧暴露3天、7天、14天组肺组织中可见大量的凋亡细胞(P0.05),尤以高氧暴露3、7天明显;凋亡细胞以肺泡上皮细胞、小气道上皮细胞及血管内皮细胞为主,部分巨噬细胞、间质细胞、浸润的炎症细胞也呈凋亡改变。免疫组化结果提示空气对照组偶有少量p-JNK阳性表达,而高氧暴露组则p-JNK阳性表达显著增多,以高氧7天组增多最为明显;阳性细胞广泛分布于肺泡上皮细胞、小气道上皮细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、间质细胞以及浸润炎症细胞。Western blot结果显示空气对照组仅有少量p-JNK蛋白表达,高氧暴露3天、7天、14天组p-JNK蛋白表达含量明显增加(P0.05),以在高氧7天组增加最为明显。在空气和高氧暴露7天,SP600125干预后肺组织p-JNK蛋白表达含量较相应未干预组均出现明显抑制(P0.05),且在高氧暴露7天,SP600125干预后显著减少了肺组织细胞的凋亡(P0.05)。 结论 1.我们成功复制出高氧性肺损伤动物模型。 2.高氧在肺损伤的急慢性阶段可诱导肺组织细胞发生凋亡,细胞凋亡是高氧肺损伤的一个重要病理组织学特点。 3. JNK信号转导通路在高氧肺损伤中被激活,可能参与了高氧肺损伤的发病机制并介导了其发生、发展。 4. JNK信号转导通路参与介导了高氧下肺细胞凋亡的信号转导,发挥促细胞凋亡效应。阻断或抑制JNK信号通路,有可能起到肺损伤保护作用。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2007
【中图分类】：R563
【部分图文】：

图 5 高氧暴露不同时段肺组织细胞凋亡指数的变化( x ±s, n=8)Fig 5 The change of cell apoptotic index in lung tissues during exposed to hyperoxia( x ±s,n=8)注：A:空气对照组 B:高氧 3 天组 C:高氧 7 天组 D:高氧 14 天组★与空气对照组比较， P＜0.05◆与高氧 14 天组比较， P＜0.052.3 p-JNK 蛋白在肺组织中表达和分布的变化空气对照组偶有少量 p-JNK 阳性表达，主要见于肺泡上皮细胞及小气道上皮细胞，高氧暴露组则阳性细胞显著增多，以高氧 7 天组增多最为明显。阳性细胞广泛分布于肺泡上皮细胞、小气道上皮细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、间质细胞以及浸润炎症细胞（图 4）。2.4 肺组织 p-JNK 蛋白表达含量的变化

A B C D 高氧暴露不同时间肺组织 p-JNK 蛋白含量的6 The change of protein level of p-JNK in luduring exposed to hyperoxia对照组 B:高氧 3 天组 C:高氧 7 天组暴露不同时段肺组织 p-JNK 蛋白含量相对变化ge of protein level of p-JNK in lung tissues dur（x ±s,n=8）p-JNK0.11±0.030.27±0.06★

图 7 高氧暴露不同时段肺组织 p-JNK 蛋白含量相对变化（x ±s,n=8）Fig7 The change of protein level of p-JNK in lung tissues during exposed to hyperoxia（x ±s,n=8）注：A:空气对照组 B:高氧 3 天组 C:高氧 7 天组 D:高氧 14 天组★与空气对照组比较， P＜0.05n ◆与高氧 3 天组比较， P＜0.052.5 JNK 抑制剂 SP600125 干预后肺组织 p-JNK 蛋白表达含量的变化Western blot 结果显示，在空气和高氧暴露 7 天，SP600125 干预后肺组织 p-JNK蛋白表达含量较相应未干预组均出现明显减少（P＜0.05）（表 3，图 8、9），说明JNK 抑制剂（SP600125）在空气和高氧暴露下均能特异性阻断 JNK 的激活。
【参考文献】

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本文编号：2836089