肥大细胞对肺成纤维细胞增殖、转化的影响

发布时间：2020-10-21 20:00

　　 目的分离大鼠肺成纤维细胞和腹腔肥大细胞作体外培养,通过肥大细胞与肺成纤维细胞接触和非接触共体培养观察,了解肥大细胞对肺成纤维细胞增殖、转化及功能的影响。 方法在无菌条件下用胰酶消化法分离成年大鼠肺成纤维细胞并用免疫组化鉴定,体外培养3代后用作实验；收集大鼠腹腔灌洗液,在无菌条件下用肥大细胞分离液分离和纯化肥大细胞,用甲苯胺蓝染色鉴定,实验分为三组：对照组：正常大鼠肺成纤维细胞培养；接触共育组：肥大细胞与肺成纤维细胞接触共体培养；非接触共育组：肥大细胞与肺成纤维细胞非接触共体培养，用Transwell共育皿区隔开肥大细胞和肺成纤维细胞,每组设3复孔,并作细胞爬片,共培养5天,每日镜下计数肺成纤维细胞数量,建立生长曲线,5天后通过免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscleactin, a-SMA), MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率,通过ELISA法检测培养液中bFGF、TGFβ1及Ⅰ型胶原蛋白含量。 结果①细胞计数显示：接触共育组各时段成纤维细胞的数目均较非接触共育组和对照组明显增多。接触共育组中成纤维细胞增殖数与非接触共育组和对照组比较,有明显差异(P0.05)；非接触共育组和对照组比较,差异不明显(P0.05).②MTT结果：接触共育组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组和非接触共育组(P0.05),提示接触共育组肺成纤维细胞增殖明显高于对照组和非接触共育组,非接触共育组比对照组也高,但差异不明显(P0.05).③免疫细胞化学染色可见接触共育组有大量α—SMA染色阳性细胞,与非接触共育组和对照组比较,α—SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加,(P0.05),提示接触共育组肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞明显增加。非接触共育组比对照组高,但差异不明显(P0.05)。④ELISA法检测结果提示,在肥大细胞与肺成纤维细胞接触共育培养组,培养液中bFGF、TGFβ1及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于非接触共育组和对照组(P0.05),提示接触共育组肺成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白和分泌bFGF、TGFβ1明显增加,非接触共育组比对照组也高,但差异不明显(P0.05)。 结论肥大细胞影响肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成；肥大细胞与肺成纤维细胞紧密接触有利于bFGF、TGFβ1的合成；肥大细胞可能通过紧密接触及合成的bFGF、TGFβ1来促进肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成；
【学位单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R563.9
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 大鼠肺成纤维细胞和腹腔肥大细胞体外分离 培养和鉴定
    材料与方法
    结果
    讨论
第二部分 肥大细胞对肺成纤维细胞增殖、转化及功能的影响
    材料与方法
    结果
    讨论
参考文献
综述
    参考文献
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致谢

【参考文献】

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本文编号：2850536