慢阻肺患者血清对PM2.5致MH-S细胞炎症的影响及Salubrinal作用机制研究

发布时间：2020-10-21 23:32

　　 第一部分:慢阻肺患者血清对PM2.5致MH-S细胞炎症的影响目的:以MH-S细胞建立模型,以慢阻肺患者血清与PM2.5刺激MH-S细胞,模拟雾霾情况下慢阻肺患者气道炎症环境,观察MH-S细胞HDAC2活性及IL-17的变化。方法:用不同浓度的慢阻肺患者及健康人血清刺激MH-S细胞,最终确定血清刺激浓度为1%、时间6h。用血清及PM2.5刺激巨噬细胞,分为:对照组、PM2.5组、慢阻肺患者血清组、健康人血清组、PM2.5+慢阻肺病人血清组、PM2.5+健康人血清组。酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测细胞上清液中IL-17浓度、活性比色法定量测定试剂盒检测细胞HDAC2活性。Pearson相关分析IL-17与HDAC2活性之间有无相关性。结果:PM2.5、血清单纯刺激MH-S细胞后,较空白对照组细胞HDAC2活性降低,IL-17分泌增加,且加入慢阻肺患者血清组较加入健康志愿者血清组IL-17升高,MH-S细胞HDAC2活性降低更明显,两组之间差异有统计学意义(P0.05)。同时加入血清和PM2.5组,MH-S细胞HDAC2活性降低、IL-17分泌增多更明显,与单纯加入PM2.5组、单纯加入血清组相比,差异有统计学意义(P0.05)。慢阻肺患者血清与PM2.5共同刺激组较健康志愿者血清与PM2.5共同刺激组IL-17升高、HDAC2活性降低明显,且差异有统计学意义(P0.05)。IL-17与HDAC2之间存在负相关(r=-0.786,P0.01)。结论:单纯PM2.5、血清会导致MH-S细胞IL-17分泌增多、HDAC2活性降低。血清会加重PM2.5对MH-S细胞的影响。慢阻肺患者血清与PM2.5共同刺激对MH-S细胞的影响较健康人血清与PM2.5更明显。HDAC2活性与IL-17呈负相关。第二部分:Salubrinal在PM2.5致MH-S细胞炎症中的作用目的:在前期研究基础上进一步以MH-S细胞为研究对象,应用salubrinal干预PM2.5刺激的MH-S,探讨salubrinal在PM2.5诱导的炎症细胞损伤中的作用。方法:本实验分为3组:(1)对照组:不给于刺激;(2)PM2.5组:培养基中加入PM2.5,使其终浓度为100ug/ml,刺激12小时;(3)PM2.5+salubrinal组:培养基中同时加入salubrina(lsalubrinal提前1小时加入30uMol)和PM2.5,刺激12小时。免疫荧光观测MH-S的CHOP、GRP78表达,ELISA测IL-17,活性比色法测HDAC2。结果:PM2.5刺激12小时后细胞较空白对照组CHOP荧光增强、核内居多,GRP78荧光增强、胞质明显,IL-17含量增加、HDAC2活性降低,差异有统计学意义(P0.05)。加入Salubrinal干预后CHOP荧光较PM2.5组减弱、GRP78荧光较PM2.5组增强、IL-17含量降低、HDAC2活性增加。差异有统计学意义(P0.05)。结论:PM2.5刺激使CHOP、GRP78表达增多,激活MH-S细胞ERS。Salibrinal抑制MH-S细胞CHOP的表达,增强GRP78的表达。Salubrinal减轻了PM2.5对MH-S细胞的损伤作用。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R563.9
【部分图文】：

慢阻肺患者血清与PM2.5对MH-S细胞分泌IL-17的影响

慢阻肺患者血清与PM2.5对MH-S细胞HDAC2活性的影响

salubrinal对PM2.5刺激的MH-S细胞分泌IL-17的影响
【参考文献】

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1 杨媛媛;刘辉国;;内质网应激及其与呼吸系统疾病的关系[J];中华哮喘杂志(电子版);2013年04期

本文编号：2850750