IL-17A对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究

发布时间：2017-04-04 14:05

  本文关键词：IL-17A对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过观察经博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织和肺泡巨噬细胞（Alveolar macrophage，AM）中IL-17A的表达，探讨IL-17A在肺纤维化发病机制中的作用和意义。方法：1.取20只Wistar雌性大鼠（体重为180~200g）随机分为生理盐水对照组（NS组）和博莱霉素致肺纤维化模型实验组（BLM组），每组10只；2.BLM组：气管内一次性注入经生理盐水稀释的博莱霉素溶液0.2ml（5mg/kg体重，BLM溶液浓度为5mg/ml），用以诱导大鼠复制肺纤维化模型；NS组：气管内一次性注入0.2ml生理盐水（1ml／kg体重）；3.然后各组分别于气管内灌注后第7天和第28天各随机处死大鼠5只，无菌操作下行支气管肺泡灌洗，回收支气管肺泡灌洗液（Bronchial Alveolar Lavage Fluid，BALF），取出肺组织，病理学方法观察各阶段肺内炎症和纤维化程度，免疫组化检测肺组织IL-17A表达。收集BALF分为两组，一组用作细胞总、分数测定，以及用酶联免疫吸附实验法（ELISA法）测定BALF中TNF-、IL-17A的含量；一组用作AM的分离与纯化、培养，培养上清液用ELISA法测定IL-17A的含量，提取AM总RNA后用逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction，RT-PCR）测定肺泡巨噬细胞IL-17A的mRNA表达。结果：1.肺组织病理切片观察：NS组第7天及第28天均无肺泡炎及肺纤维化表现，肺组织结构正常；BLM组第7天时主要表现为肺泡炎，BLM组第28天时主要表现为肺纤维化，但肺泡炎仍存在；2.BALF细胞总、分数的测定结果分析：NS组BALF细胞总数无明显变化，而BLM组BALF细胞总数第7天明显增高，与NS组比较，差异有统计学意义(P0.05)，第28天BALF细胞总数恢复至正常水平，与NS组比较，差异无统计学意义(P0.05)；3.肺泡炎和肺纤维化分级计分的定量分析：NS组各时间点均未表现肺泡炎及肺纤维化。BLM组肺泡炎程度在第7天表现显著，与NS组比较，差异有统计学意义(P0.05)，第28天时肺泡炎仍存在，但程度明显减轻，与NS组比较，差异无统计学意义(P0.05)。BLM组肺纤维化程度在第7天表现中度，在第28天表现显著，与NS组比较肺纤维化均加重，差异有统计学意义(P0.05)。4.免疫组化肺组织IL-17A蛋白的分析：NS组大鼠肺组织中IL-17A表达弱，第7天及第28天均无明显变化，而BLM组第7天及第28天IL-17A表达较NS组比较明显增强，差异均有统计学意义（P0.05），第28天表达较第7天有所降低。5.ELISA检测BALF中TNF-、IL-17A显示NS组大鼠BALF中的TNF-、IL-17A含量无明显变化，，而BLM组第7天及第28天TNF-、IL-17A含量明显增高，与NS组比较，差异有显著统计学意义(P0.01)，但第28天时TNF-、IL-17A含量较第7天降低。6.ELISA检测AM培养上清液中IL-17A显示NS组7天、28天AM各时期培养中呈弱表达，各时期之间相比较，差异无统计学意义（P0.05）；BLM组7天、28天AM培养第12小时、第24小时、第48小时上清液中IL-17A的表达与NS组比较均明显增高，差异显著有统计学意义（P0.01）。7.RT-PCR检测显示IL-17A在NS组AM各时期培养中有微弱表达，各时期之间相比较，差异无统计学意义（P0.05）；BLM组7天、28天各时期的表达明显高于NS组，差异有统计学意义（P0.05），尤以第12h显著，24h、48h表达逐渐减弱。8.相关分析：BALF中细胞总数、BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺组织IL-17A蛋白的表达与肺泡炎程度积分呈正相关。 BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺组织IL-17A蛋白的表达三者之间呈正相关。第7天时BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺组织IL-17A蛋白的表达分别与BALF中性粒细胞数呈正相关；而第28天时它们之间的相关性较差。结论：1.本实验通过博莱霉素诱导成功建立了大鼠肺纤维化模型。2.肺纤维化的发展中，肺泡巨噬细胞和肺组织中IL-17A表达及分泌均升高，在肺泡炎阶段尤为明显。3. IL-17A可能促进了肺泡炎的发展，并且在肺纤维化的发生、发展病理过程中可能参与了作用。
【关键词】：肺泡巨噬细胞 IL-17A 博莱霉素 肺纤维化
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-23
• 结果23-37
• 讨论37-43
• 结论43-44
• 参考文献44-50
• 英汉缩略词对照表50-51
• 致谢51-52
• 综述52-65
• 参考文献59-65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 张纾难,王辛秋,李兰群,韩春生,晁恩祥;益肺化纤方治疗肺纤维化的实验研究[J];中国医药学报;1999年06期

2 甘红英;刘学军;;转化生长因子-β_1及其受体在肺纤维化中的作用[J];国际呼吸杂志;2006年11期

3 邹华;李其皓;董昭兴;;Th17细胞与肺纤维化[J];临床肺科杂志;2011年03期

4 陶章;李惠萍;;不同剂量博莱霉素致小鼠肺纤维化模型的比较[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年07期

5 赵洪文,彭璐,吕长俊,侯显明,于润江;肺纤维化大鼠BALF中细胞成分与肺组织病理的动态研究[J];中国医科大学学报;1997年05期

6 戴令娟;侯杰;蔡后荣;王伟;张道中;;川芎嗪当归治疗肺间质纤维化的实验研究[J];中华结核和呼吸杂志;1996年01期

7 孔灵菲 ,康健;中华医学会第六届全国呼吸病学术会议纪要[J];中华结核和呼吸杂志;2004年12期

  本文关键词：IL-17A对肺纤维化大鼠肺组织炎症的调控研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：285641