目的：Notch信号通路是一高度保守的信号转导途径,广泛表达于淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞及组织细胞等,γ-分泌酶抑制剂(GSI)是Notch信号通路的有效阻滞剂。本研究通过研究Notch信号通路中Notch1受体及其下游靶基因Hes1在慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)肺泡巨噬细胞(AM)上的表达,及血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌,探讨Notch信号通路在慢阻肺炎症中的作用。方法：SPF级BALB/c雄性小鼠80只,随机分为健康对照组,健康GSI组,慢阻肺组、慢阻肺GSI组。采用单纯香烟烟雾法建立慢阻肺小鼠模型；采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法测定AM Notch1、Hes1的mRNA表达量；采用蛋白印迹(Western blot)法测定AM中Notch1、Hes1的蛋白含量；采用酶联免疫吸附实验测定血清及BALF中IL-6和TNF-α的的含量。结果：(1)单纯香烟烟雾暴露90天成功建立小鼠慢阻肺模型。慢阻肺组小鼠吸气峰流速和呼气峰流速分别为(6.82±0.46)ml/s、(3.87±0.44)ml/s明显低于健康对照组(9.84±0.46)ml/s、(7.96±0.52)ml/s,(P0.01、0.05)；肺组织病理,光镜下可见慢阻肺组小鼠肺组织明显的支气管炎症和肺气肿改变。(2)AM中Notch1与Hes1 mRNA表达：慢阻肺组AM中Notch1 mRNA的相对表达量(1.45±0.16)较健康对照组(0.64±0.16)、健康GSI组(0.55±0.28)明显增加,差异有统计学意义(均P0.01)。慢阻肺GSI组AM中Notch1 mRNA的相对表达量(0.72±0.37)较慢阻肺组(1.45±0.16)表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。慢阻肺组AM中Hes1 mRNA的相对表达量(2.24±0.33)较健康对照组(1.03±0.26)、健康GSI组(1.14±0.27)明显增加,差异有显著统计学意义(均P0.01)。慢阻肺GSI组AM中Hes1 mRNA的相对表达量(1.244±0.32)较慢阻肺组(2.244±0.33)表达减少,差异有统计学意义(P0.01)。(3)AM中Notch1与Hes1蛋白测定：慢阻肺组AM中Notch1蛋白的相对含量(1.96±0.07)较健康对照组(1.05±0.07)、健康GSI组(1.09±0.04)明显增加,差异有统计学意义(均P0.01)。慢阻肺GSI组AM中Notch1蛋白的相对含量(1.11±0.03)较慢阻肺组(1.96±0.07)表达减少,差异有统计学意义(P0.01)。慢阻肺组AM中Hes1蛋白的相对含量(1.30±0.02)较健康对照组(0.93±0.06)、健康GSI组(0.90±0.06)明显增加,差异有统计学意义(均P0.01)。慢阻肺GSI组AM中Hesl蛋白的相对含量(1.11±0.04)较慢阻肺组(1.30±0.02)表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。(4) BALF及血清中IL-6、TNF-α含量测定：①慢阻肺组、慢阻肺GSI组小鼠BALF中IL-6 (81.84±2.06、58.36±1.90)pg/ml较健康对照组、健康GSI组(30.82±2.01、29.24±1.40)pg/ml增多,差异有显著统计学意义(P0.01)；慢阻肺GSI组较慢阻肺组减少,差异有显著统计学意义(P0.01)。慢阻肺组、慢阻肺GSI组小鼠血清中IL-6(98.36±2.18、67.23±2.40)pg/ml较健康对照组、健康GSI组(39.08±1.81、37.94±3.12)pg/ml增多,差异有显著统计学意义(P0.01)；慢阻肺GSI组较慢阻肺组减少,差异有显著统计学意义(P0.01)。②慢阻肺组、慢阻肺GSI组小鼠BALF中TNF-α(63.04±3.84、43.86±2.63)pg/ml较健康对照组、健康GSI组(24.84±1.56、23.71±1.79)pg/ml增多,差异有显著统计学意义(P0.01)；慢阻肺GSI组较慢阻肺组减少,差异有显著统计学意义(P0.01)。慢阻肺组、慢阻肺GSI组小鼠血清中TNF-α(69.35±2.94、52.77±2.66) pg/ml较健康对照组、健康GSI组(20.38±1.93、19.69±1.43)pg/ml增多,差异有显著统计学意义(P0.01)；慢阻肺GSI组较慢阻肺组减少,差异有显著统计学意义(P0.01)。(5)相关性分析：①慢阻肺组小鼠AM中Notch1 mRNA的相对表达量与血清中IL-6的水平呈正相关,r=0.871,P0.01；与BALF中IL-6的水平呈正相关,r=0.850,P0.01。Notch1蛋白与血清中IL-6的水平呈正相关,r==0.874,P0.01；与BALF中IL-6的水平呈正相关,r=0.819,P0.01。慢阻肺组小鼠AM中Hes1mRNA的相对表达量与血清中IL-6的水平呈正相关,r=0.825,P0.01；与BALF中IL-6的水平呈正相关,r=0.948,P0.01。Hes1蛋白含量与血清中IL-6的水平呈正相关,r=0.814,P0.01；与BALF中IL-6的水平呈正相关,r=0.726,P0.05。②慢阻肺组小鼠AM中Notch1 mRNA的相对表达量与血清中TNF-α的水平呈正相关,r==0.828,P0.01；与BALF中TNF-α的水平呈正相关,r=0.872,P0.01。Notch1蛋白的相对表达量与血清中TNF-α的水平呈正相关,r=0.928,P0.01；与BALF中TNF-α的水平呈正相关,r=0.847,P0.01。慢阻肺组小鼠AM中HeslmRNA的相对表达量与血清中TNF-α的水平呈正相关r==0.877,P0.01；与BALF中TNF-α的水平呈正相关,r=0.855,P0.01。Hesl蛋白的相对表达量与血清中TNF-α的水平呈正相关,r=0.801,P0.01；与BALF中TNF-α的水平呈正相关,r=0.714,P0.05。③慢阻肺GSI组小鼠AM中Notch1 mRNA的相对表达量与血清中IL-6的水平呈正相关,r=0.879,P0.01；与BALF中IL-6的水平呈正相关,r=0.819,P0.01。Notch1蛋白与血清中IL-6的水平呈正相关r=0.786,P0.01；与BALF中IL-6的水平呈正相关,r=0.919,P0.01。慢阻肺GSI组小鼠AM中Hes1mRNA的相对表达量与血清中IL-6的水平呈正相关,r=0.887,P0.01；与BALF中IL-6的水平呈正相关,r=0.805,P0.01。Hes1蛋白含量与血清中IL-6的水平呈正相关,r=0.905,P0.01；与BALF中IL-6的水平呈正相关,r=0.910,P0.01。④慢阻肺GSI组小鼠AM中Notch1 mRNA的相对表达量与血清中TNF-α的水平呈正相关,r=0.708,P0.05；与BALF中TNF-α的水平呈正相关,r=0.723,P0.05。Notch1蛋白的相对表达量与血清中TNF-α的水平呈正相关,r=0.814,P0.01；与BALF中TNF-α的水平呈正相关,r=0.795,P0.01。慢阻肺GSI组小鼠AM中Hes1 mRNA的相对表达量与血清中TNF-α的水平呈正相关r=0.707,P0.05；与BALF中TNF-α的水平呈正相关,r=0.764,P0.05。Hesl蛋白的相对表达量与血清中TNF-α的水平呈正相关,r=0.744,P0.05；与BALF中TNF-α的水平呈正相关,r=0.801,P0.01。结论：单纯香烟烟雾暴露法可以成功建立小鼠慢阻肺模型；慢阻肺小鼠肺组织局部与全身均存在炎症反应；Notch信号通路可能调控AM参与肺组织局部和全身炎症反应；GSI能部分抑制]Notch1/Hes1及其下游细胞因子水平,Notch1/Hes1通路参与慢阻肺的炎症反应。
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R563.9
【文章目录】：中文摘要
Abstract
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
在学期间的研究成果
英文缩略词表
致谢
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本文编号：
2873356
