LRRC8A在脂多糖诱导大鼠急性肺损伤肺水清除率下降中的作用研究

发布时间：2020-11-10 13:54

　　 第一部分脂多糖诱导急性肺损伤模型的建立及LRRC8A表达变化目的:通过气道给予SD大鼠脂多糖,检测肺组织病理,相关炎症指标,肺部湿/干比例及肺水清除率评估肺损伤模型并观察LRRC8A表达变化。方法:1.实验动物分组方案:30只雄性SD大鼠随机分为两组,每组15只。每组于6h,12h及24h分别处死5只。分别为阴性对照物组,脂多糖(LPS)处理组。阴性对照组气道注入生理盐水1ml,LPS处理组气道注入脂多糖(5mg/kg)。2.检测指标及方法:用Evans Blue法计算肺泡液体清除率,ELISA法检测肺泡灌洗液中的炎症因子TNF-α及IL-1β;右肺下叶行肺组织HE染色;右肺中叶用于肺部湿/干比例(Wet/Dry,W/D)的测定;右肺上叶用于通过Western Blot及RT-PCR法检测LRRC8A表达变化。结果:对照组其肺组织未见明显病理损伤,LPS处理组6,12,24小时均可见肺部病理损伤,损伤程度呈时间依赖性加重;LPS处理组较对照组相比,肺水清除率明显下降(27.4±1.29%vs 17.01±0.71%,P0.01);W/D比值升高(4.85±0.09 vs 6.44±0.12,P0.05);肺泡灌洗液中,IL-1β表达水平升高(7.58±0.76 vs 31.66±2.40,P0.01),TNF-α表达水平升高(50.20±10.21 vs 760.01±20.20,P0.01);LRRC8A蛋白表达及mRNA表达水平均显著减低(P0.05)。结论:1.气管内注入脂多糖后,可以造成肺部炎症损伤及肺水肿形成。2.急性肺损伤时,LRRC8A蛋白及mRNA表达降低,推测LRRC8A参与急性肺损伤过程。第二部分过表达LRRC8A对急性肺损伤大鼠肺水清除率的影响目的:通过鼻部注射腺病毒(Ad-sftpc-lrrc8a)在大鼠肺部过表达LRRC8A蛋白,探讨LRRC8A在急性肺损伤大鼠中肺水清除中的作用。方法:1腺病毒肺组织转染效果验证:18只SD大鼠分为三组,A组即含肺部特异性启动子对照组(Ad-sftpc-EGFP),B组即腺病毒腺病毒实验组(Ad-sftpc-lrrc8a-EGFP),C组即腺病毒空载体对照组(Ad-EGFP)。鼻腔内分别注入不同组腺病毒40ul/只,病毒滴度为2E+10 PFU/ml。2周后每组各取三只取材,用激光共聚焦显微镜观察报告基因GFP绿色荧光表达水平。用Western Blot法验证该腺病毒转染过表达效果。2过表达LRRC8A对急性肺损伤大鼠肺水清除率的影响:腺病毒注入2周后,每组各取3只SD大鼠,按照第一部分步骤建造ALI模型,测定AFC水平变化。结果:1.腺病毒组织转染结果验证:鼻腔注入空载腺病毒(Ad-EGFP)后,肺组织病理HE染色结构正常;激光共聚焦纤维镜观察可见:ABC三组肺部均可见绿色荧光表达,C组与A、B组相比,肝、肾、脾可见明显绿色荧光表达;肺组织LRRC8A蛋白表达结果:Western Blot结果显示B组比C组及A组LRRC8A水平明显升高(P0.01)。2.急性肺损伤大鼠过表达LRRC8A后,B组肺水清除率较A组明显升高(P0.01)。结论:Sftpc启动子诱导腺病毒靶向转染至肺组织,可造成LRRC8A在肺组织过表达。过表达LRRC8A的急性肺损伤大鼠,AFC较对照组降低,提示LRRC8A可能参与肺水清除过程,对急性肺损伤具有保护作用。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R563
【部分图文】：

19图 1.肺部苏木精伊红染色结果Fig.1 Lung histology of control group,LPS-induced groups in6h,12h,24h.(stained by HE,100×)

图 2. 肺内液体清除及肺泡灌洗液炎症指标Fig.2Alveolar fluid clearance and inflammation indicators in BALA:Detection ofAlveolar fluid clearance(AFC) in control group andLPS-induced group; B:Mesurement of Wet/Dry in control group anS-induced group;C: Comparison of IL-β level in BALF between co LPS group; D: Comparison of TNF-α level in BALF between contrLPS group.,*P＜0.05,LPS vs NS,**P＜0.05,LPS vs NS.

图3. LRRC8A的蛋白及mRNA表达水平.3Aand B:Expression of LRRC8A protein in LPS-induced grou,12h and 24h(n=3); F:Relative LRRC8AmRNAexpressions at diffepoint(6h,12h,24h) after LPS exposure.The relative mRNAexpresre calculated by 2-△△Ct(n=3).*P＜0.05,LPS vs NS,**P＜0.05,LPS v
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本文编号：2878007