TRPV4介导的小鼠气管平滑肌舒张机制研究

发布时间：2017-04-15 00:17

  本文关键词：TRPV4介导的小鼠气管平滑肌舒张机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的阐明花生四烯酸细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表氧化酶代谢产物14,15-环氧化二十碳三烯酸(14,15-epoxyeicosatrienoic acid,14,15-EET)对小鼠气管平滑肌收缩功能的影响及其机制。本研究采用离体气管环张力实验和免疫共沉淀法检测14,15-EET对卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩的影响以及TRPV4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)通道蛋白与小电导钙激活钾通道(small conductance Ca2+-activated K+channels,SKCa)蛋白在小鼠气管平滑肌组织中的相互作用。方法1.离体气管环制备雄性小鼠,昆明种,体重在20~25g,清洁级,6周龄。经CO2窒息法处死后,迅速取出喉部以下主支气管,放入通有混合气体(95%O2和5%CO2)的Krebs-Henseleit缓冲液中,维持p H在7.4±0.05。轻柔地去除气管外周结缔组织,用粗糙的金属丝小心去除气管内皮,然后沿纵轴将气管剪成长约2 mm气管环。2.等长张力实验运用BL-420S生物机能实验系统采集张力信号数据,记录经不同阻断剂和300nmol/L 14,15-EET预处理后,不同浓度卡巴胆碱的量效关系。3.免疫共沉淀使用免疫共沉淀方法检测TRPV4和SKCa蛋白在小鼠气管平滑肌中是否存在相互作用。实验所得数据均以sx±,并运用Sigma Plot 12.5软件进行多因素方差分析作图,P0.05为具有统计学显著性差异。4.统计学处理结果1.卡巴胆碱可以浓度依赖的引起小鼠气管环收缩(10-10~10-3 mol/L),与对照组相比,300 nmol/L 14,15-EET预处理使卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩显著减弱(*P0.05)。2.大、中电导钙激活钾通道阻断剂50μmol/L Ib TX和10μmol/L TRAM-34没有显著影响300 nmol/L 14,15-EET对卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩的抑制效应;而SKCa阻断剂1μmol/L Apamin显著阻断了14,15-EET对卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩的抑制作用(*P0.05)。3.TRPV4通道阻断剂20μmol/L RN-1734与对照组相比,明显减弱了14,15-EET对卡巴胆碱引起的小鼠气管收缩的抑制效应(*P0.05)。4.TRPV4蛋白和SKCa通道蛋白第三亚型SK3可以彼此相互共沉淀,TRPV4通道蛋白与SKCa通道蛋白存在相互作用。结论在小鼠气管平滑肌中,14,15-EET通过TPRV4-SKCa钙信号复合物调节气管平滑肌的收缩。目的TRPV4作为非选择性阳离子通道对钙离子具有较高通透性,且在组织内分布广泛。被敏感性刺激激活后,通道开放引起胞浆内钙离子浓度显著升高,钙离子浓度变化会直接影响气道平滑肌的收缩/舒张状态。胞内1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)可以激活三磷酸肌醇受体(IP3R)介导细胞内钙离子由肌质网释放。TRPV4通道激活导致的钙离子内流,引起局部Ca2+浓度增加,可以促进Na+/Ca2+交换体(NCX2)发挥作用。因而,本实验利用离体小鼠气管环张力测定、免疫共沉淀等方法,观察在小鼠气管收缩调节中TRPV4、IP3R1、NCX2是否存在相互作用。方法1.离体气管环制备同第一部分实验方法。2.等长张力实验BL-420S生物机能实验系统采集张力信号数据,记录不同药物处理和卡巴胆碱收缩后,不同浓度TRPV4通道激动剂GSK1016790A对气管舒张作用的量效关系。3.免疫共沉淀使用免疫共沉淀方法检测TRPV4和NCX2及IP3R1蛋白在小鼠气管平滑肌中是否存在相互作用。4.统计学处理实验所得数据均以sx±,并运用Sigma Plot 12.5软件进行多因素方差分析作图,P0.05为具有统计学显著性差异。结果1.TRPV4通道激动剂GSK106790A可以浓度依赖的使卡巴胆碱收缩的小鼠气管环舒张,与对照组相比,NCX阻断剂5μmol/L KB-R7943和Li Cl预处理引起的小鼠气管舒张显著被抑制(*P0.05)。2.与对照组相比,TRPV4通道阻断剂10μmol/L HC067047预处理后,GSK106790A引起的小鼠气管舒张作用显著减弱(*P0.05)。3.与对照组相比,4μmol/L TG预处理后,明显抑制了GSK106790A引起的小鼠气管的舒张效应(*P0.05)。4.与对照组相比,10μmol/L Ryanodine预处理后,对GSK106790A引起的小鼠气管舒张作用没有显著效应。5.TRPV4蛋白和IP3R1通道蛋白及NCX蛋白第二亚型NCX2可以彼此相互共沉淀,存在相互作用。结论在小鼠气管平滑肌中,存在TPRV4-IP3R1-NCX2的钙信号复合物调节气管平滑肌的舒张与收缩效应。
【关键词】：钙激活钾通道 小电导钙激活的钾通道 瞬时受体电位通道 14 15-EET 气管平滑肌 TRPV4TRPV4通道 钠钙交换体 IP3受体 气管平滑肌
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R56
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 1. 14, 15-EET通过TRPV4-SKCa复合物调节气管平滑肌收缩机制研究7-31
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-19
• 结果19-25
• 讨论25-28
• 结论28-29
• 参考文献29-31
• 2. TRPV4-NCX2-IP3R1信号复合物对气管平滑肌的收缩调节作用31-50
• 中文摘要31-33
• 英文摘要33-36
• 前言36-37
• 材料与方法37-38
• 结果38-45
• 讨论45-47
• 结论47-49
• 参考文献49-50
• 附录50-51
• 致谢51-52
• 综述 钙库操纵钙内流分子组成及其机制52-60
• 参考文献58-60

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本文编号：307194