EL-7013促进Sirt1调控TGF-β 1 /Smad3通路抑制肺纤维化

发布时间：2021-03-27 17:10

　　目的:对比EL-7013和吡非尼酮（pirfenidone,PFD）的抗纤维化作用及可能机制。方法:向C57BL/6小鼠气管内滴注3 mg/kg博来霉素（bleomycin,BLM）构建肺纤维化动物模型重组人TGF-β₁（10 ng/mL）诱导人胚肺成纤维细胞（human embryonic lung fibroblasts,HLF-1）建立肺纤维化细胞模型,分别用EL-7013和PFD干预处理,机制探讨实验用EX-527抑制Sirt1表达及活性。HE、Masson染色评估肺组织病理变化,Western blot检测肺组织中COL1A1、COL3A1、α-SMA等纤维化指标和TGF-β₁、Phospho-Smad1/Smad1、Phospho-Smad3/Smad3等通路指标表达,碱水法检测肺组织羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）含量。CCK-8检测细胞增殖活性,免疫荧光染色、Western blot、RT-qPCR检测细胞模型中纤维化及TGF-β₁/Smad通路相关指标的蛋白和mRNA表达水平。结果:EL... 

【文章来源】：重庆医科大学学报. 2020,45(06)北大核心CSCD

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【部分图文】：

Western blot检测肺组织中COL1A1、COL3A1、α-SMA蛋白的表达

图6 Western blot、RT-qPCR检测HFL-1细胞中COL1A1、COL3A1、α-SMA蛋白及mRNA水平2.3 Sirt1对EL-7013抗纤维化及调控TGF-β1/Smad通路作用的影响

如图10A、B所示，TGF-β1+EX-527组的TGF-β1和Phospho-Smad3的蛋白表达水平均较单独TGF-β1组明显升高，而TGF-β1+EX-527+EL-7013组的TGF-β1和PhosphoSmad3的蛋白表达水平介于TGF-β1+EX-527组和TGF-β1+EL-7013组之间，且差异有统计学意义（TGF-β1蛋白表达：tTGF+EX-527=38.272,P=0.001;tTGF+EL-7013=-25.436,P=0.002;Phospho-Smad3蛋白表达：tTGF+EX-527=6.080,P=0.026;tTGF+EL-7013=-6.009,P=0.027）。如图10C示，EX-527特异性抑制Sirt1后，TGF-β1的mRNA表达水平均较TGF-β1组明显升高，TGF-β1+EX-527+EL-7013组的TGF-β1的m RNA表达水平低于TGF-β1+EX-527组，但高于TGF-β1+EL-7013组，且差异均有统计学意义（tTGF+EX-527=35.695,P=0.001;tTGF+EL-7013=-84.303,P=0.000）。图9 免疫荧光染色、Western blot、RT-qPCR检测抑制Sirt1后HFL-1细胞COL1A1、COL3A1、α-SMA蛋白及mRNA水平


本文编号：3103875