Wnt/β-catenin信号通路在肺纤维化形成中的机制研究
发布时间：2021-04-18 11:01
目的：特发性肺纤维化为致命的肺部疾病。其特点是肺上皮细胞损伤,肺成纤维细胞／肌成纤维细胞增殖和细胞外基质过渡沉积,造成肺结构破坏。但机制不明。最近的证据表明,Wnt信号通路在IPF患者异常活跃。本研究采用Wntl蛋白干预人胚肺成纤维细胞,探讨对细胞增殖、活化的影响；通过Wntl蛋白及β-catenin质粒干预A549细胞,探讨Wnt/β-catenin信号通路对肺上皮细胞-间质转变作用。通过模型鼠,观察肺纤维化形成过程中,β-catenin动态变化规律。用肺纤维化模型鼠的支气管肺泡灌洗液培养HEPF和A549细胞,探讨对细胞表型转变的影响,及与Wnt/β-catenin信号通路的相关性；用P-catenin基因siRNA干扰慢病毒沉默β-catenin,再用支气管肺泡灌洗液培养细胞,对细胞表型转变的影响,进一步揭示Wnt/β-catenin信号通路对成纤维细胞活化、增殖及肺上皮细胞-间质转变的作用。方法：我们用不同浓度的Wntl干预人胚肺成纤维细胞,MTT检测细胞增殖率,RT-PCR及westen blot检测a-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达；不同浓度的Wntl干预A54...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
第一章 绪论
1.1 肺纤维化研究现状
1.2 Wnt/β-catenin信号通路的基本结构和表达调控
1.3 Wnt/β-catenin信号通路与肺纤维化疾病的相互关系
1.4 Wnt/β-catenin和TGF-β信号相互联系
1.5 结语
1.6 研究目的、研究方案、技术路线
1.6.1 研究目的
1.6.2 研究内容
1.6.3 研究方案
1.6.4 技术路线
参考文献
第二章 Wnt1对人胚肺成纤维细胞作用
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.1.3 统计学方法
2.2 结果
2.2.1 MTT测定Wnt1干预后细胞增殖率
2.2.2 不同浓度Wnt1干预细胞后,α-SMA、vimentin、collagen-Ⅰ蛋白表达
2.2.3 不同浓度Wnt1干预细胞后,α-SMA、vimentin、collagen-Ⅰ基因表达
2.2.4 免疫荧光显示Wnt1干预HEPF细胞后β-catenin核转位
2.3 讨论
第三章 Wnt1、β-catenin质粒对A549细胞的作用
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.1.3 统计学方法
3.2 结果
3.2.1 Wnt1诱导A549细胞E-cad、α-SMA、vimentin和collagen Ⅰ蛋白表达
3.2.2 Wnt1干预A549细胞E-cad、α-SMA、vimentin和collagen Ⅰ基因表达
3.2.3 免疫荧光显示Wnt1干预A549细胞后β-catenin核移位
3.2.4 β-catenin质粒转染A549细胞后细胞表型改变
3.3 讨论
第四章 β-catenin在肺纤维化模型鼠肺组织中的表达
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 实验方法
4.1.3 统计学方法
4.2 结果
4.2.1 博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型建立
4.2.2 免疫组织化学检测肺组织中β-catenin蛋白动态表达
4.2.3 Westen Blot检测肺组织中β-catenin蛋白的动态表达
4.3 讨论
第五章 β-catenin基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及鉴定
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 实验方法
5.1.3 统计学方法
5.2 结果
5.2.1 携带目的基因慢病毒质粒的测序分析结果
5.2.2 慢病毒颗粒的包装和滴度测定
5.2.3 慢病毒感染HEPF细胞体外感染效率的测定（MOI试验）
5.2.4 慢病毒转染HEPF细胞后β-catenin蛋白的表达
5.2.5 慢病毒转染HEPF细胞后β-catenin基因表达
5.3 讨论
第六章 肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液对HEPF及A549细胞影响
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.1.2 方法
6.1.3 统计学方法
6.2 结果
6.2.1 肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液对HEPF细胞影响
6.2.2 β-catenin siRNA慢病毒转染HEPF细胞
6.2.3 慢病毒转染HEPF细胞后肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液培养细胞
6.2.4 肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液对A549细胞影响
6.2.5 β-catenin siRNA慢病毒转染A549细胞
6.2.6 慢病毒转染A549细胞后肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液培养细胞
6.3 讨论
第七章 主要结论、学术创新与展望
7.1 主要结论
7.2 学术创新
7.3 展望
参考文献
致谢
读博期间发表的论文,参加的课题
本文编号：3145360
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
第一章 绪论
1.1 肺纤维化研究现状
1.2 Wnt/β-catenin信号通路的基本结构和表达调控
1.3 Wnt/β-catenin信号通路与肺纤维化疾病的相互关系
1.4 Wnt/β-catenin和TGF-β信号相互联系
1.5 结语
1.6 研究目的、研究方案、技术路线
1.6.1 研究目的
1.6.2 研究内容
1.6.3 研究方案
1.6.4 技术路线
参考文献
第二章 Wnt1对人胚肺成纤维细胞作用
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.1.3 统计学方法
2.2 结果
2.2.1 MTT测定Wnt1干预后细胞增殖率
2.2.2 不同浓度Wnt1干预细胞后,α-SMA、vimentin、collagen-Ⅰ蛋白表达
2.2.3 不同浓度Wnt1干预细胞后,α-SMA、vimentin、collagen-Ⅰ基因表达
2.2.4 免疫荧光显示Wnt1干预HEPF细胞后β-catenin核转位
2.3 讨论
第三章 Wnt1、β-catenin质粒对A549细胞的作用
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.1.3 统计学方法
3.2 结果
3.2.1 Wnt1诱导A549细胞E-cad、α-SMA、vimentin和collagen Ⅰ蛋白表达
3.2.2 Wnt1干预A549细胞E-cad、α-SMA、vimentin和collagen Ⅰ基因表达
3.2.3 免疫荧光显示Wnt1干预A549细胞后β-catenin核移位
3.2.4 β-catenin质粒转染A549细胞后细胞表型改变
3.3 讨论
第四章 β-catenin在肺纤维化模型鼠肺组织中的表达
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 实验方法
4.1.3 统计学方法
4.2 结果
4.2.1 博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型建立
4.2.2 免疫组织化学检测肺组织中β-catenin蛋白动态表达
4.2.3 Westen Blot检测肺组织中β-catenin蛋白的动态表达
4.3 讨论
第五章 β-catenin基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及鉴定
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 实验方法
5.1.3 统计学方法
5.2 结果
5.2.1 携带目的基因慢病毒质粒的测序分析结果
5.2.2 慢病毒颗粒的包装和滴度测定
5.2.3 慢病毒感染HEPF细胞体外感染效率的测定（MOI试验）
5.2.4 慢病毒转染HEPF细胞后β-catenin蛋白的表达
5.2.5 慢病毒转染HEPF细胞后β-catenin基因表达
5.3 讨论
第六章 肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液对HEPF及A549细胞影响
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.1.2 方法
6.1.3 统计学方法
6.2 结果
6.2.1 肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液对HEPF细胞影响
6.2.2 β-catenin siRNA慢病毒转染HEPF细胞
6.2.3 慢病毒转染HEPF细胞后肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液培养细胞
6.2.4 肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液对A549细胞影响
6.2.5 β-catenin siRNA慢病毒转染A549细胞
6.2.6 慢病毒转染A549细胞后肺纤维化模型鼠支气管肺泡灌洗液培养细胞
6.3 讨论
第七章 主要结论、学术创新与展望
7.1 主要结论
7.2 学术创新
7.3 展望
参考文献
致谢
读博期间发表的论文,参加的课题
本文编号：3145360
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