N-Myc和STAT交互子在甲型流感病毒性肺炎的作用及调控机制

发布时间：2021-05-27 07:08

　　甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）是引起人类急性呼吸系统传染病的典型病原体,已经多次全球爆发流行,造成了世界范围内大量的发病和死亡。临床上,严重流感病毒感染的患者表现为双侧肺浸润和低氧血症,并常死于急性肺损伤（acute lung injury,ALI）或急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）。甲型流感病毒易感人群广泛,变异率高。除了流感疫苗疗效受限之外,抗病毒药物的耐药等原因导致甲型流感病毒性肺炎的防治日渐困难。天然免疫系统作为机体抵抗病毒入侵的第一道防线,在IAV入侵机体后,宿主的模式识别受体（pattern recognition receptors,PRRs）可以迅速识别病毒的病原体相关分子模式（pathogen associated molecular patterns,PAMPs）,诱导下游核转录因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）、干扰素调节因子（interferon regulatory factor,IRF）3和IRF7的活化,启动I型干扰素（IFN-I... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
ABSTRACT
缩略词表
一、引言
二、材料与方法
    1.实验材料及设备
        1.1 实验动物
        1.2 流感病毒
        1.3 细胞系
        1.4 实验主要抗体
        1.5 实验主要试剂与试剂盒
        1.6 实验相关的载体和分子克隆
        1.7 实验耗材、仪器和设备
    2.基础试剂配制
        2.1 细胞培养基
        2.2 小鼠腹腔巨噬细胞诱导液
        2.3 DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶
        2.4 细菌培养基
        2.5 免疫印迹相关试剂
        2.6 细胞样品制备相关试剂
    3.实验方法
        3.1 Nmi基因敲除小鼠的鉴定
        3.2 细胞的常规培养
        3.3 小鼠腹腔巨噬细胞的提取和培养
        3.4 流感病毒的扩增
        3.5 流感病毒的滴定
        3.6 小鼠病毒感染
        3.7 小鼠肺组织分离、匀浆和肺泡灌洗液的收集
        3.8 小鼠肺组织病毒滴定测定
        3.9 细胞的刺激和感染
        3.10 真核细胞的小干扰RNA和质粒转染
        3.11 细胞总蛋白提取和浓度测定
        3.12 Western Blot
        3.13 免疫共沉淀
        3.14 质粒的抽提
        3.15 RNA的抽提和纯化
        3.16 逆转录PCR和荧光定量PCR
        3.17 酶联免疫吸附试验
        3.18 荧光素酶报告基因检测
        3.19 免疫荧光
        3.20 差异表达基因分析
    4.实验结果的统计学分析
三、实验结果
    1.甲型流感病毒感染诱导NMI表达升高
    2.体外敲除NMI促进甲型流感病毒感染后细胞因子的表达
    3.NMI缺失增强抗病毒免疫反应
        3.1 NMI缺失增强小鼠对流感病毒的抵抗力
        3.2 NMI缺失降低流感病毒感染后小鼠的肺部炎症反应
        3.3 NMI缺失促进小鼠肺部I型干扰素和抗病毒ISG基因的表达
        3.4 NMI缺失抑制流感病毒在小鼠肺部的复制
    4.NMI抑制抗病毒天然免疫信号通路的活化
        4.1 NMI抑制流感病毒诱导的ISRE和 NF-κB的活化
        4.2 NMI负向调节天然免疫信号通路中IRF3、IRF7、NF-κB、P38和STAT的磷酸化水平
    5.NMI通过NID1和NID2 结构域与IRF3及IRF7 相互作用
        5.1 NMI与 IRF3和IRF7 相互作用
        5.2 NMI通过NID1和NID2 结构域与IRF3及IRF7 结合
    6.NMI促进IRF3和IRF7 的蛋白酶体途径的降解
    7.NMI促进IRF3和IRF7的K48 位泛素化修饰
    8.NMI通过招募E3 泛素连接酶TRIM21 催化IRF3和IRF7 的泛素化和降解
        8.1 TRIM21 是与IRF3和IRF7 相互作用的E3 连接酶
        8.2 NMI与 TRIM21 相互作用
        8.3 TRIM21 降低IRF3和IRF7 蛋白水平
        8.4 NMI依赖于TRIM21 促进IRF3和IRF7 泛素化和降解
四、讨论
五、总结
参考文献
综述 泛素化在抗病毒天然免疫反应中的作用
    (综述)参考文献
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]泛素化的功能及其意义[J]. 王翔,魏潇凡,张宏权.  中国科学:生命科学. 2015(11)
[2]Severe acute respiratory syndrome coronavirus protein 6 mediates ubiquitin-dependent proteosomal degradation of N-Myc（and STAT） interactor[J]. Weijia Cheng,Shiyou Chen,Ruiling Li,Yu Chen,Min Wang,Deyin Guo.  Virologica Sinica. 2015(02)



本文编号：3207142