Wnt/β-catenin信号调控IL-17A介导的巨噬细胞极化对肺脏上皮细胞间质化特性的影响

发布时间：2021-06-28 06:09

　　背景:肺纤维化（Pulmonary fibrosis,PF）是由多种原因引起的一种严重的慢性肺间质性疾病。主要特征是早期的弥漫性肺泡炎和肺泡持续损伤,后期成纤维细胞大量病理性增殖,伴随细胞外基质（Extracellularmatrix,ECM）异常性汇聚,导致肺结构破坏,最终导致肺纤维化。炎症已被认为是肺纤维化的最初原因,并且上皮-间充质转化（Eβithelial-mesenchymal transition,EMT）是促进肺纤维化进程的重要发病机理。巨噬细胞是一类专业的免疫细胞,在维持免疫稳态方面具有重要作用。在肺纤维化过程中,巨噬细胞也发挥着重要作用,根据所处的微环境以及外界刺激极化为两种不同的功能状态,即经典活化的巨噬细胞（M1）和替代活化的巨噬细胞（M2）而发挥其免疫调控作用。Wnt信号是机体维持组织稳定和损伤修复的关键信号通路,在免疫调节中起着非常重要的作用。白介素17A（IL-17A）是一种能够诱导巨噬细胞极化的的免疫调节剂,并且与宿主防御和各种免疫相关疾病有关。有研究表明,Wnt信号和IL-17都在肺纤维化进程中异常活化。目的:本研究探讨Wnt/β-catenin信号的活... 

【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校

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图３－２．ＩＬ－１７Ａ逆转Ｗｍ３ａ改变的Ｋ噬细胞极化标志物的表达Ａ．不同处理组ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ的蛋白表达分析：Ｂ．不??同处理组ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ的蛋白表达定Ｓ分析

ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｔｏ?ｔｈｅ?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ?ｇｒｏｕｐｓ．?＃：?ｐ＜０．０５，?＃＃：?ｐ＜０．０１．??接下来，我们运用流式细胞术检测Ｍｌ型巨噻细胞表面标志物ＣＤ８６和Ｍ２型巨噬细胞表面??标志物ＣＤ２０６来进一步验证上述结果。结果显示（图３－５），在使用ＷｎｔＣ－ＣＭ培养细胞时，??ＲＡＷ２６４．７细胞中分别含有３９．９１％的Ｍｌ型巨噬细胞和２７．３％的Ｍ２型巨噬细胞；Ｗｎｔ３ａ－ＣＭ增??加了?ＣＤ２０６阳性的Ｍ２型巨噬细胞，并且ＩＬ－１７Ａ増加了?ＣＤ８６阳性的Ｍｌ型巨噬细胞。有趣的??是，ＩＬ－１７Ａ改变的Ｍｌ、Ｍ２巨噻细胞的数量可以被ＷｎｔＳａ部分逆转，并且通过添加ＸＡＶ９３９可??以在一定程度上减少ＷｎｔＳａ的抵消作用。这些结果清除的表明在ＲＡＷ２６４．７细胞中，Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ??信号能够负调控ＩＬ－１７Ａ诱导的巨噬细胞细胞极化。??３．３．３?Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ对ＩＬ－１７Ａ介导的巨嗤细胞极化调控机制探讨??接下来，我们试图研宄Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信号调控ＩＬ－１７Ａ介导的巨噬细胞极化的潜在作用机制。??巨噬细胞极化由各种转录因子的激活而受到严格的调控，并且已经证明Ｓｔａｔ信号参与该调控过程。??因此，我们检测了?Ｓｔａｔ信号通路相关蛋白来探宄其是否参与Ｗｎｔ３ａ调控的ＩＬ－１７Ａ介导的巨噬细??胞极化。正如预期的那样，结果显示，ＷｎｔＳａ和ＩＬ－１７Ａ确实可以通过增加ｐ－ＳＴＡＴｌ的表达来增??强Ｓｔａｔ信号传导

气管上皮细胞的微孔膜置于加入了?ＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ?Ｅｘ－Ｐｌｕｓ的６孔板中，将６孔板放置于３７°Ｃ，５％Ｃ０２??的培养箱中培养，２４ｈ后，将膜上培养基弃去，将微孔膜下方培养基更换为含２％ＦＢＳ的ＵＳＧ培??养基，培养２４ｈ后，更换为完全ＵｌｔｒｏＳｅｒＧ（ＵＳＧ）培养基，从而建立气液相培养条件。如图４－１??所示，在气液相培养条件下，微孔膜下方的ＵＳＧ培养液每两天更换一次。??小鼠管丨：皮细胞??ｍｈｈｍｈｈｂｈｈ???孔隙支拎脱??图４－１．小鼠气管上皮细胞气液相培养模型??Ｆｉｇｕｒｅ?４－１．?Ａｉｒ－ｌｉｑｕｉｄ?ｉｎｔｅｒｆａｃｅ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｍｏｕｓｅ?Ｔｒａｃｈｅａｌ?ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ?ｃｅｌｌｓ??４．２．４气液相培养的小鼠气管上皮细胞（ｍＴＥＣ）与ＲＡＷ２６４．７细胞共培养??从液氮罐中取出一株冻存的ＲＡＷ２６４．７细胞复苏，传代，待细胞生长状态处于稳定且活力较??好时，当其融合率达至８０％－９０％时，弃去培养基，加入４ｍＬ预热的ＰＢＳ轻轻漂洗一遍，加入２ｍＬ??－３８－??

【参考文献】：
期刊论文
[1]巨噬细胞在肺纤维化的发病机制研究进展[J]. 黄雁超,李流云,崔向清,黄春芳.  重庆医学. 2015(21)
[2]阻断IL-17A活化p50NF-κB抑制小鼠肺损伤引起的肺纤维化[J]. 米粟,李辙,刘虹,胡卓伟,花芳.  药学学报. 2012(06)



本文编号：3253777