Ghrelin通过AKT/ERK信号通路对LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响

发布时间：2021-06-28 06:53

　　目的:研究Ghrelin对内毒素（Lipopolysaccharide,LPS）所致的肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）凋亡的影响及其机制。方法:CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测LPS刺激对A549的细胞毒性;原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞内一氧化氮（NO）的产生;Western blot检测诱导型一氧化氮合成酶（iN OS）、AKT、ERK、p-AKT、p-ERK信号通路蛋白以及cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2凋亡相关蛋白的表达。结果:CCK-8检测结果显示LPS可显著抑制A549细胞的增殖,降低细胞活力;TUNEL检测发现Ghrelin可显著抑制LPS导致的A549细胞的凋亡（P<0.05）;LPS可以促进iN OS的表达,增加细胞内NO的产生,并同时抑制AKT、ERK通路的活性,上调下游促凋亡蛋白Bax以及终末凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,而应用Ghrelin预处理后可以逆转LPS对AKT、ERK通路活性的抑制,继而下调Bax以及cleaved ca... 

【文章来源】：中国免疫学杂志. 2017,33(08)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要材料、试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1 A549细胞研究分组
        1.2.2 运用CCK-8检测各组肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 的活力
        1.2.3 TUNEL法检测各组肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 的凋亡
        1.2.4 DAF-FM DA (NO荧光探针) 检测肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 内NO的产生
        1.2.5 免疫印迹法测定i NOS、p-AKT、p-ERK、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3的蛋白表达情况
        1.2.6 免疫荧光法测定肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 中cleaved caspase-3的表达
    1.3 统计学处理
2 结果
    2.1 LPS对肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 活力的影响
    2.2 Ghrelin对LPS刺激下肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 凋亡的影响
    2.3 LPS对肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 中i NOS表达的影响
    2.4 Ghrelin对肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 中NO产生的影响
    2.5 Ghrelin对肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 内AKT及ERK信号通路中p-AKT、p-ERK蛋白表达的影响
    2.6 Ghrelin对LPS刺激下肺泡Ⅱ型上皮细胞 (A549) 中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleavedcaspase-3表达的影响
3 讨论



本文编号：3253843