p38MAPK通路对IL-1β刺激肺成纤维细胞表达ICAM-1的影响

发布时间：2017-04-29 23:15

  本文关键词：p38MAPK通路对IL-1β刺激肺成纤维细胞表达ICAM-1的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：肺内成纤维细胞增殖、细胞间粘附分子（intercellular adhesionmolecule-1，ICAM-1）表达是肺纤维化主要的发病机制，p38促丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号途径作为细胞内的主要信息传递系统之一，可以将细胞外的信息传递至细胞核中,可能参与肺纤维化的形成及发展过程。本研究在体外培养Wistar胎鼠肺成纤维细胞，观察IL-1β对肺成纤维细胞中表达ICAM-1的影响，测定磷酸化的p38MAPK（p-p38MAPK）及其下游底物AP-1的表达水平，探讨p38MAPK通路在ICAM-1表达过程中的作用及可能涉及的细胞因子，深入研究肺纤维化的发病机制，并为其提供可能的治疗靶点。 方法：Wistar胎鼠肺成纤维细胞培养：乙醚吸入麻醉临产Wistar孕鼠，取出胎鼠，开胸取出胎鼠肺组织，将支气管及结缔组织剔除，然后剪成1×1×1mm3大小的胎鼠肺组织块，放入含有胎牛血清（20%）的DMEM培养基，吹打均匀后涂于培养瓶。待细胞铺满瓶底后进行传代，在传代过程中去除红细胞、上皮细胞及残余组织块等，使用结构、形态一致的第5~6代成纤维细胞进行实验。 将培养的肺成纤维细胞分为三组（每组6复孔），(1)对照组：应用只含有DMEM培养液的培养基，培养肺成纤维细胞6小时；(2)IL-1β组：应用含IL-1β（15ng/ml）的DMEM培养基，培养肺成纤维细胞6小时；(3)SB203580+IL-1β组：用p38MAPK抑制剂SB203580（100μM/L）预先处理成纤维细胞20分钟后，应用含IL-1β（15ng/ml）的DMEM培养基，培养肺成纤维细胞6小时。采用RT-PCR方法检测ICAM-1mRNA表达水平；采用Western blotting法测定p-p38MAPK、AP-1/Jun蛋白的表达水平。 结果： 1成功培养Wistar胎鼠原代肺成纤维细胞：本实验采用组织培养技术培养Wistar胎鼠肺成纤维细胞，5~10h后显微镜下观察到组织块周围有圆形细胞游走出，1周左右，这种细胞逐渐变为椭圆或菱形，并呈放射状，足变长，相邻细胞间融合，互相连接，细胞核明亮，，大且圆。经过2~3次胰酶消化纯化，逐渐清除上皮细胞、红细胞及残留的组织块等，然后可见到较接近理想实验模型的肺成纤维细胞：形态一致，胞体丰满，胞质均匀，核仁清晰，生长良好，存在核分裂相。2RT-PCR技术检测ICAM-1mRNA在肺成纤维细胞中表达水平的变化 ICAM-1mRNA电泳条带的光密度扫描显示：在肺成纤维细胞中，对照组ICAM-1mRNA有一定量的基础表达，为（0.303±0.011）；IL-1β组的ICAM-1mRNA表达量为（0.887±0.051），与对照组相比均明显升高（P0.05）；SB203580+IL-1β组的ICAM-1mRNA表达量为（0.719±0.014），明显低于IL-1β组的表达量（P0.05），但比对照组的表达量升高（P0.05）。3Western blot技术检测p-p38MAPK、AP-1/Jun蛋白在肺成纤维细胞中表达水平的变化 在肺成纤维细胞中p-p38MAPK蛋白存在一定量的基础表达，对照组为（0.295±0.033）；IL-1β组中为（0.735±0.025），显著高于对照组p-p38MAPK蛋白的表达水平（P0.05）；SB203580+IL-1β组中为（0.492±0.010），明显低于IL-1β组p-p38MAPK蛋白的表达水平(P0.05)。 AP-1/Jun蛋白在肺成纤维细胞中存在基础表达，对照组为（0.188±0.002）；IL-1β组为（0.712±0.033），明显高于对照组的AP-1/Jun蛋白表达水平（P0.05）；SB203580+IL-1β蛋白表达为（0.321±0.006），明显低于IL-1β组的AP-1/Jun蛋白表达水平(P0.05)，但明显高于对照组的AP-1/Jun蛋白表达水平（P0.05）。 结论: 1在正常肺成纤维细胞中有一定量低水平ICAM-1，IL-1β刺激后，肺成纤维细胞的ICAM-1表达显著升高； 2IL-1β可能通过磷酸化p38MAPK激活p38MAPK信号通路，上调肺成纤维细胞ICAM-1的表达； 3IL-1β激活p38MAPK信号通路，激活的p38MAPK活化转录因子AP-1，AP-1与ICAM-1启动子上的AP-1受体结合，诱导ICAM-1表达。
【关键词】：肺纤维化 肺成纤维细胞 ICAM-1 IL-1β p38MAPK AP-1
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9
• 材料与方法9-18
• 结果18-20
• 附图20-22
• 附表22-23
• 讨论23-27
• 结论27
• 参考文献27-31
• 综述 p38MAPK信号转导通路在肺脏疾病中的研究进展31-48
• 参考文献39-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 闫文生,姜勇,赵克森;ICAM-1基因表达的调节[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2001年05期

2 王小慧;刘学军;;IL-1β及其Ⅰ型受体在大鼠肺纤维化发生过程中的动态表达[J];中国医药导报;2010年09期

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本文编号：335809