热休克蛋白70在气道黏液高分泌中的作用
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【摘要】:目的观察香烟提取物(Cigarette smoke extract, CSE)诱导气道黏液高分泌中热休克蛋白70 (Heat shock protein 70, HSP70)及AP-1 (Activator protein-1, AP-1)的变化及关系,探讨热休克蛋白70在气道黏液高分泌中的作用及机制。方法用8%香烟提取物处理人气道A549细胞株(Human airway cells, A549)后,分别给予HSP70抗体阻断剂、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)特异性抑制剂SP600125进行干预。实验共分4组:空白对照组(无血清、双抗培养液进行培养)、CSE刺激组(加入8%CSE培养24 h)、HSP70抗体组(HSP70单抗预处理30min,再给予8%CSE继续培养24 h)、SP600125组(加入JNK特异性抑制剂SP60012530 μmol/L预处理30 mmin,再给予8%CSE继续培养24h)。酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测各组中MUC5AC在蛋白水平的相对表达量,逆转录-PCR(Reverse transcription-PCR, RT-PCR)检测MUC5ACmRNA的相对表达量,Western印迹法检测HSP70水平,Western印迹法检测JNK及AP-1(主要为c-Jun)磷酸化水平。结果CSE刺激组细胞MUC5ACmRNA、MUC5AC蛋白、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun相对表达量(0.64±0.11、0.52±0.07、0.73±0.06、0.67±0.10、0.67±0.09)均显著高于空白对照组(0.28±0.06、0.26±0.10、0.30±0.05、0.30±0.08、0.36±0.08)、HSP70抗体组(0.29±0.09、0.30±0.12、0.34±0.06、0.47±0.19、0.39±0.13)和SP600125组(0.31±0.14、0.38±0.06、0.39±0.04、0.44±0.12、0.48±0.11),HSP70(0.75±0.09)也显著高于空白对照组(0.29±0.03)、HSP70抗体组(0.40±0.11)(均P0.05)。结论CSE可以诱导气道上皮细胞中HSP70及AP-1的升高,同时HSP70可能通过JNK/AP-1信号通路上调气道A549细胞中MUC5AC的表达。
【关键词】:HSP70热休克蛋白质类 黏蛋白类 香烟提取物 激活蛋白
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R56
【目录】:
- 英汉缩略语名词对照5-7
- 中文摘要7-9
- 英文摘要9-11
- 前言11-12
- 1. 材料与方法12-21
- 2. 结果21-24
- 3. 讨论24-27
- 全文总结27-28
- 参考文献28-32
- 文献综述32-42
- 参考文献37-42
- 致谢42-43
- 硕士期间发表的论文43
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本文编号:338701
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