多西环素对哮喘大鼠VEGF、MMP-9的作用及血管重塑的影响

发布时间：2017-05-01 19:13

  本文关键词：多西环素对哮喘大鼠VEGF、MMP-9的作用及血管重塑的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究多西环素对哮喘大鼠VEGF、MMP-9表达的影响。成功建立哮喘大鼠模型，检测肺组织及血清中VEGF和MMP-9水平，并结合气道壁厚度及血管密度反映血管重塑、气道重塑；通过对比多西环素干预后VEGF、MMP-9水平及气道壁厚度、血管密度的变化，探讨多西环素对哮喘气道重塑、血管重塑的作用。 方法：将33只清洁级SD大鼠（雄性，6周龄，体重50-100g之间）随机分成正常对照组、哮喘模型组和多西环素干预组，每组11只。其中哮喘模型组方法制备，分别于实验第1、8天对大鼠腹腔注射OVA100mg和氢氧化铝100mg（混于生理盐水2mL中）进行致敏，第15天起将大鼠置于自制的非完全密闭雾化吸入箱内，给予OVA溶液雾化吸入，隔日1次，每次30min，共激发20次，根据大鼠表现调整其浓度。当大鼠出现烦躁、呛咳、呼吸急促、活动量下降等典型的哮喘发作的表现时为激发成功。而多西环素组则在每次OVA雾化吸入前30min按30mg/kg经口腔灌服方式给予小鼠多西环素，正常对照组以生理盐水代替OVA；以上两组致敏和激发方法与哮喘组相同。在最后一次激发24小时后，，将大鼠以1%戊巴比妥钠麻醉，取材。收集支气管肺泡灌洗液，计数细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞及嗜酸性粒细胞；部分肺组织行病理切片，HE染色；免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织中VEGF和MMP-9的表达变化，并应用图像分析软件技术测量VEGF和MMP-9的相对表达强度；ELISA法检测血清中的VEGF的含量；应用计算机图像分析技术测定气道壁厚度及血管密度。 结果： 1支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数及细胞分类的变化：细胞总数及嗜酸性粒细胞结果（×106/L）：正常对照组分别为9.42±3.67、1.24±0.72，哮喘组分别为35.53±7.06、4.84±0.65，多西环素组分别为14.66±5.81、2.14±0.58。三组中哮喘组的细胞总数和嗜酸性粒细胞均高于其他两组，有统计学意义（P＜0.01）；而多西环素组亦高于对照组，有统计学意义（F=64.840，P＜0.05；F=90.598，P＜0.01）。 2病理结果：哮喘组大鼠肺组织病理切片可见支气管黏膜增厚、气道平滑肌明显增厚、血管增生、血管壁增厚，且支气管黏膜下及肺泡间质等处可见大量炎性细胞浸润。多西环素组的支气管壁增厚程度、血管增生及炎性细胞浸润等均较哮喘组减轻。正常对照组的大鼠肺组织病理切片可见支气管管腔规则，支气管黏膜上皮、黏膜肌层、肺组织结构完整，偶可见炎性细胞。 3图像分析结果：哮喘组大鼠的气道壁厚度（μm~2/μm）与血管密度（个/mm~2）（109.95±13.85；155.55±14.31）均高于多西环素组（86.37±5.85；116.64±7.33），有统计学意义（P＜0.01）；两组又均高于对照组（65.47±7.22；95.45±7.19），有统计学意义（F=58.737，P＜0.01；F=98.885，P＜0.01）。 4免疫组化法结果：哮喘组大鼠肺组织中MMP-9及VEGF的平均光密度值（0.52±0.06、0.45±0.04）高于多西环素组（0.39±0.06、0.27±0.06），有统计学意义（P＜0.05）；两组均高于对照组（0.24±0.06、0.21±0.04），有统计学意义（F=57.966，P＜0.01；F=75.261，P＜0.01）。 5ELISA法测定血清中VEGF的含量（pg/ml）：哮喘组大鼠血清中的VEGF含量（202.86±16.90）高于多西环素组（169.94±16.65），有统计学意义（P＜0.01），两组均高于对照组（137.75±17.02），有统计学意义（F=41.043，P＜0.01）。 6相关性分析结果：血管密度与气道壁厚度呈显著正相关（r=0.891，P＜0.01），与肺组织中MMP-9、VEGF的表达水平呈显著正相关（r=0.793，P＜0.01；r=0.889，P＜0.01），与血清中VEGF水平呈显著正相关（r=0.855，P＜0.01）；肺组织中MMP-9与VEGF的表达水平呈显著正相关（r=0.796，P＜0.01）。 结论： 1哮喘组大鼠气道中存在明显的炎性细胞浸润，提示哮喘是由多种炎性细胞参与的气道炎症，而多西环素可明显减轻气道炎症。 2多西环素可明显减轻哮喘大鼠肺组织中的腺体增生、气道壁增厚、血管增生等病理改变，亦可明显降低气道壁厚度及血管密度，且气道壁厚度与血管密度呈显著正相关，说明新生血管形成在气道重塑过程中起着重要作用，是其中的重要方面，而多西环素可明显减轻气道重塑、血管重塑。 3哮喘大鼠MMP-9及VEGF的表达水平明显升高，而多西环素可使二者表达水平明显降低，且MMP-9与VEGF表达水平呈正相关，证实在哮喘的发病过程中，VEGF、MMP-9发挥着重要作用，且二者之间存在协同调节关系；而多西环素可抑制MMP-9的活性和表达，并可导致VEGF表达的下调。 4相关分析结果显示大鼠MMP-9、VEGF表达水平与血管密度呈正相关，证实MMP-9、VEGF对哮喘血管重塑有重要作用，可共同促进新生血管形成，参与哮喘气道重塑、血管重塑；多西环素减轻哮喘血管重塑，即可能是通过降低二者表达水平，而达到减轻气道炎症及血管重塑、气道重塑作用的。
【关键词】：哮喘 血管重塑 血管内皮生长因子 基质金属蛋白酶-9 多西环素
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-17
• 结果17-19
• 附图19-29
• 附表29-31
• 讨论31-36
• 结论36-37
• 参考文献37-41
• 综述 VEGF 和 MMP-9 与支气管哮喘血管重塑的关系41-51
• 参考文献47-51
• 致谢51-52
• 个人简历52

【参考文献】

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本文编号：339505