CREB在LPS致肺微血管内皮细胞损伤过程中的作用

发布时间：2017-05-10 03:04

  本文关键词：CREB在LPS致肺微血管内皮细胞损伤过程中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的 cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein，CREB）是一种重要的核转录因子，能调控基因启动子中含有CRE（cAMP response element）序列的目的基因转录，具有复杂的生物学功能。大量研究表明CREB可能在急性呼吸窘迫综合征、肺动脉高压、糖尿病视网膜病变、卵巢过度刺激综合征等血管屏障破坏的疾病中发挥重要作用，其机制与CREB调控血管通透性和炎症反应等密切相关。然而CREB对血管内皮细胞功能的影响复杂，其在肺微循环屏障炎症损伤中是否起作用尚不清楚。本实验拟探讨CREB在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）致大鼠肺微血管内皮细胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC）炎症损伤过程中的作用。 方法 体外分离培养RPMVEC，经不同浓度（0、0.1、1、10、100mg·L-1）LPS及不同时间（0、10、30、60、120min）处理，或PKA通路特异性抑制剂(PKI)预孵育30min。Western-blot法检测CREB磷酸化水平；伊文思蓝-白蛋白法（EBA）观察RPMVEC单层通透性的变化。 结果 1)体外成功分离、培养出RPMVEC，并经形态学及异硫氰酸标记的植物凝集素结合实验鉴定证实。 2)随着LPS孵育浓度的增加（（0、0.1、1、10、100mg·L-1），RPMVEC中CREB（Ser-133）磷酸化水平逐渐增加；10mg·L-1LPS作用于RPMVEC后，CREB（Ser-133）磷酸化水平呈时间依赖性地增加，30min达高峰，随后逐渐下降，120min仍高于正常对照组。 3) LPS亦呈时间依赖性地增加CREB表达，，于1h开始升高，3h达峰值，随后逐渐下降，至孵育24h表达水平仍高于正常对照组。 4)加入PKA特异性通路抑制剂PKI预孵育RPMVEC30min后，LPS诱导的CREB(Ser-133)磷酸化几乎被完全抑制,与单纯LPS刺激组比较，二者具有统计学差异（P 0.05）；PKI单独作用于RPMVEC30min后，与正常对照组比较，二者CREB（Ser-133）磷酸化水平无统计学差异（P＞0.05）。 5)与正常对照组相比，10mg·L-1LPS刺激使RPMVEC的通透性显著增加（（P 0.05）；而10μmol·L-1PKI与10mg·L-1LPS共孵育后，RPMVEC通透性较单纯10mg·L-1LPS刺激组显著增加（P 0.05）；与正常对照组比较，PKI单独作用也可增加细胞单层通透性，差异具有统计学意义（P 0.05）。 结论 1) LPS呈浓度及时间依赖方式诱导RPMVEC中CREB（Ser-133）快速磷酸化，PKA通路介导了上述过程。 2) CREB（Ser-133）磷酸化在LPS致RPMVEC炎症损伤过程中可能起到保护作用。
【关键词】：cAMP反应元件结合蛋白 脂多糖 肺微血管内皮细胞 大鼠 通透性
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 1. 前言12-14
• 2. 材料与方法14-25
• 3. 结果25-30
• 4. 讨论30-33
• 5. 结论33
• 不足及工作计划33
• 参考文献33-38
• 附录38-39
• 致谢39-40
• 综述40-47
• 参考文献45-47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 牛向馨;;重症卵巢过度刺激征及三胎妊娠诊治成功一例报告[J];海南医学;2011年11期

2 朱耀斌;范祥明;李晓锋;李志强;刘爱军;李刚;刘迎龙;;人心房利尿钠肽减轻油酸诱导大鼠急性肺损伤炎症反应实验研究[J];中华实用诊断与治疗杂志;2013年04期

3 张泓,孙耕耘;血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对大鼠肺微血管内皮炎性损伤效应的影响[J];中国危重病急救医学;2004年10期

4 何萍;陈家欢;黄晓亮;于洪波;莫宁;;慢性吗啡处理对大鼠交感神经节pCREB和CREB mRNA表达的影响[J];中国药理学通报;2013年02期

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本文编号：353845