地塞米松对BALB/c哮喘小鼠sIL-4RmRNA作用及sIL-4R基因腺病毒载体的构建

发布时间：2022-01-27 06:19

　　目的：sIL-4R蛋白的临床Ⅰ/Ⅱ期试验，证实导入外源性的sIL-4R减少糖皮质激素剂量，甚至可用于SRA的治疗。但sIL-4R存在纯化工艺复杂，且应用剂量大，长期反复应用又容易产生抗sIL-4R抗体等不利因素。为了克服上述缺陷，我们尝试构建sIL-4R基因腺病毒载体，应用其来基因治疗重症哮喘或SRA。方法：本实验利用卵蛋白鼻腔滴注的方法，复制出BALB/c小鼠的哮喘模型，采用半定量RT-PCR的方法，检测地塞米松腹腔内注射后不同时间内IL-4R和sIL-4R mRNA水平的变化；BALB/c小鼠的脾脏细胞悬液与5ng／ml的IL-4共孵育4小时，采用TRIzol一步法提取脾细胞的RNA，RT-巢式PCR获得小鼠的sIL-4R基因并测序；应用分子克隆技术构建sIL-4R基因腺病毒载体，并经脂质体介导与腺病毒骨架载体PJM17共转染293细胞，获得重组腺病毒。结果：（l）地塞米松对IL-4Rα mRNA、sIL-4R mRNA的影响地塞米松治疗组及阳性对照组哮喘小鼠各时相点肺组织中IL-4Rα mRNA基因条带与内参β-actin的灰度相对值行各组间及组内相对灰度值t检验，结果示p值均大... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市211工程院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文缩写
"><中文摘要>
"><中文关键词>
"><英文摘要>
"><英文关键词>
前言
材料
第一部分:糖皮质激素对哮喘小鼠肺组织sIL-4受体作用的研究
    方法
    结果
第二部分：sIL-4受体基因的克隆及鉴定
    方法
    结果
第三部分：重组sIL-4R腺病毒载体的构建和包装
    方法
    结果
讨论
小结
"><参考文献>
致谢
综述一：激素抵抗型哮喘的发病机理和治疗
综述二：白介素4受体（IL-4R）与支气管哮喘
附录



本文编号：3611937