MAPK4在内毒素诱导的小鼠急性肺损伤中的作用研究
发布时间：2022-02-15 02:29
本课题研究包括二部分,分述如下:目的:第一部分检测MAPK4在内毒素诱导的小鼠急性肺损伤中的表达;观察MAPK4敲除对急性肺损伤的影响并探讨其相关机制。第二部分观察干扰MAPK4表达对内毒素诱导的小鼠急性肺损伤的影响。方法:第一部分1.利用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）按照10mg/kg的剂量对C57BL/6野生型小鼠（Wild type,WT）进行腹腔注射,构建小鼠急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）模型;Real-time PCR检测小鼠肺脏组织中MAPK4的mRNA水平;免疫印迹（Western blot,WB）检测小鼠肺脏组织中MAPK4的蛋白水平;免疫荧光（Immunofluorescence,IF）检测小鼠肺脏组织中MAPK4的表达及定位情况。2.利用LPS腹腔注射WT和MAPK4基因敲除(MAPK4-/-)小鼠,分别构建ALI模型;观察记录两组小鼠的生存情况;24h后取小鼠肺脏组织,记录小鼠体重指数和肺脏脏器指数变化,并检测肺脏干湿重比;BCA法检测小鼠肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavag...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常肺脏与ALI/ARDS急性期肺脏Fig1.ThehealthlylungandtheactuephaseofALI/ARDS.(ThompsonBTetal.NEnglJMed.2017.)
遵义医科大学硕士学位论文冒灵14重要原因之一就是，ALI/ARDS发生的分子病理机制十分复杂。因此，探讨ALI/ARDS发生的分子病理机制，将会为临床治疗和预防药物的开发提供新的潜在靶点。2MAPK家族概述丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinases,MAPKs)，即丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可将细胞外信号传递至细胞内，参与真核细胞的增殖、分化、凋亡等多种生物学过程[9-11]。MAPK家族分子包括经典MAPK分子和非经典MAPK分子，其中经典MAPK分子有：细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶家族(JNK1/2/3)、p38异构体(p38α/β/γ/δ)和细胞外信号调节激酶5(ERK5)，非经典MAPK分子有：Nemo样激酶(NLK)、细胞外信号调节激酶3(ERK3)、细胞外信号调节激酶4(ERK4)和细胞外信号调节激酶7/8(ERK7/8)(图2)[12,13]。研究发现，经典MAPK分子中多个成员参与ALI的病理发生过程，如：图2.MAPK信号通路Fig2.TheMAPKsignalingpathway.(CargnelloMetal.MicrobiolMolBiolRev.2011.)Carnesecchi等[14]研究发现在低氧诱导的小鼠ALI中，p-JNK和p-ERK的表达明显增多；Schnyder-Candrian等[15]研究发现p38MAPK调节小鼠ALI急性期支气管收缩，并且影响中性粒细胞招募过程；Schuh等[16]研究发现，使用ERK1/2的抑制剂U0126处理小鼠可以明显减轻LPS诱导的肺损伤，表现为肺泡灌洗液中
遵义医科大学硕士学位论文冒灵433结果3.1MAPK4-/-小鼠的鉴定根据TheJacksonLaboratory[18]，MAPK4-/-小鼠的构建是利用基因同源重组，将MAPK4外显子2的部分区域进行了置换。我们提取小鼠基因组DNA，经PCR扩增后，琼脂糖凝胶电泳结果显示：MAPK4-/-小鼠的PCR产物出现在330bp的位置，而WT小鼠的PCR产物出现在220bp的位置(图1)，与公司提供的资料一致。图1鉴定小鼠基因型。Fig.1Identificationgenetypeofmice.TheelectrophoresisofPCRproductsofWTandMAPK-/-miceon1%agarosegel.3.2MAPK4在小鼠ALI中的表达3.2.1小鼠ALI模型的建立我们根据前期研究利用LPS诱导小鼠ALI模型，如图2-1A所示。HE染色结果显示：与对照组小鼠相比，ALI模型小鼠肺脏组织中肺泡间质明显增厚，炎性细胞浸润显著增加(图2-1B)。这些结果表明，我们成功建立了小鼠ALI模型。
【参考文献】：
期刊论文
[1]MAPK4敲除对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响[J]. 冒灵,胡琳,刘士明,褚风云,贾力,陈超,徐林. 中国免疫学杂志. 2019(11)
[2]Upregulation of nemo-like kinase is an independent prognostic factor in colorectal cancer[J]. Wei Zhang,Jian He,Yan Du,Xian-Hua Gao,Yan Liu,Qi-Zhi Liu,Wen-Jun Chang,Guang-Wen Cao,Chuan-Gang Fu. World Journal of Gastroenterology. 2015(29)
本文编号：3625732
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常肺脏与ALI/ARDS急性期肺脏Fig1.ThehealthlylungandtheactuephaseofALI/ARDS.(ThompsonBTetal.NEnglJMed.2017.)
遵义医科大学硕士学位论文冒灵14重要原因之一就是，ALI/ARDS发生的分子病理机制十分复杂。因此，探讨ALI/ARDS发生的分子病理机制，将会为临床治疗和预防药物的开发提供新的潜在靶点。2MAPK家族概述丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinases,MAPKs)，即丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可将细胞外信号传递至细胞内，参与真核细胞的增殖、分化、凋亡等多种生物学过程[9-11]。MAPK家族分子包括经典MAPK分子和非经典MAPK分子，其中经典MAPK分子有：细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶家族(JNK1/2/3)、p38异构体(p38α/β/γ/δ)和细胞外信号调节激酶5(ERK5)，非经典MAPK分子有：Nemo样激酶(NLK)、细胞外信号调节激酶3(ERK3)、细胞外信号调节激酶4(ERK4)和细胞外信号调节激酶7/8(ERK7/8)(图2)[12,13]。研究发现，经典MAPK分子中多个成员参与ALI的病理发生过程，如：图2.MAPK信号通路Fig2.TheMAPKsignalingpathway.(CargnelloMetal.MicrobiolMolBiolRev.2011.)Carnesecchi等[14]研究发现在低氧诱导的小鼠ALI中，p-JNK和p-ERK的表达明显增多；Schnyder-Candrian等[15]研究发现p38MAPK调节小鼠ALI急性期支气管收缩，并且影响中性粒细胞招募过程；Schuh等[16]研究发现，使用ERK1/2的抑制剂U0126处理小鼠可以明显减轻LPS诱导的肺损伤，表现为肺泡灌洗液中
遵义医科大学硕士学位论文冒灵433结果3.1MAPK4-/-小鼠的鉴定根据TheJacksonLaboratory[18]，MAPK4-/-小鼠的构建是利用基因同源重组，将MAPK4外显子2的部分区域进行了置换。我们提取小鼠基因组DNA，经PCR扩增后，琼脂糖凝胶电泳结果显示：MAPK4-/-小鼠的PCR产物出现在330bp的位置，而WT小鼠的PCR产物出现在220bp的位置(图1)，与公司提供的资料一致。图1鉴定小鼠基因型。Fig.1Identificationgenetypeofmice.TheelectrophoresisofPCRproductsofWTandMAPK-/-miceon1%agarosegel.3.2MAPK4在小鼠ALI中的表达3.2.1小鼠ALI模型的建立我们根据前期研究利用LPS诱导小鼠ALI模型，如图2-1A所示。HE染色结果显示：与对照组小鼠相比，ALI模型小鼠肺脏组织中肺泡间质明显增厚，炎性细胞浸润显著增加(图2-1B)。这些结果表明，我们成功建立了小鼠ALI模型。
【参考文献】：
期刊论文
[1]MAPK4敲除对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响[J]. 冒灵,胡琳,刘士明,褚风云,贾力,陈超,徐林. 中国免疫学杂志. 2019(11)
[2]Upregulation of nemo-like kinase is an independent prognostic factor in colorectal cancer[J]. Wei Zhang,Jian He,Yan Du,Xian-Hua Gao,Yan Liu,Qi-Zhi Liu,Wen-Jun Chang,Guang-Wen Cao,Chuan-Gang Fu. World Journal of Gastroenterology. 2015(29)
本文编号：3625732
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