microRNA-33调控THP-1巨噬细胞炎症应答及其相关机制

发布时间：2017-05-14 21:02

  本文关键词：microRNA-33调控THP-1巨噬细胞炎症应答及其相关机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：Micro RNAs(mi RNAs)是一类内源性非编码的小RNA分子,由18~25个核苷酸组成。它通过特异性碱基配对方式结合到靶基因m RNA的3'UTR(untranslated region),从而诱导靶基因m RNA降解或抑制其翻译,在转录后水平来调控基因的表达。先前的研究表明,mi R-33a可以通过靶向结合ABCA1,沉默其表达,抑制apo A-Ⅰ介导的胆固醇流出。然而,mi R-33是否可以负性调控脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的THP-1巨噬细胞炎症反应尚知之甚少,仍有待研究。基于以上研究背景,我们以LPS刺激THP-1巨噬细胞建立炎症模型,首次研究了mi R-33在调控炎症反应中所起的作用,旨在阐明:1.mi R-33是否参与调控THP-1巨噬细胞的炎症应答;2.探讨mi R-33参与调控THP-1巨噬细胞炎症应答的机制。第一部分mi R-33抑制巨噬细胞炎症反应首先,我们检测LPS诱导活化的THP-1巨噬细胞炎症应答中mi R-33表达的变化。结果发现,LPS诱导THP-1巨噬细胞活化后,mi R-33的表达显著上调。随着LPS浓度的增加,其mi R-33的表达逐渐增加,说明其效应具有LPS的浓度依赖性,并且在10 ng/ml LPS作用时变化最为显著。随后,我们将成熟mi R-33模拟物(mi R-33mimics)和mi R-33阻遏物(mi R-33 inhibitor)分别导入THP-1巨噬细胞细胞内,人为上调或下调细胞内mi R-33的表达水平,进而观察细胞炎症因子分泌情况的变化。实验结果表明,mi R-33可以负性调控LPS诱导活化的THP-1巨噬细胞炎症应答。第二部分mi R-33通过靶向作用于NRIP1抑制巨噬细胞炎症应答但是,mi R-33是通过与哪些靶基因m RNA的3'UTR相结合,并负向调控THP-1巨噬细胞炎症介质表达的机制还不明确。我们通过Targetscan和Mi RDB等micro RNAs靶向预测软件发现NRIP1的3'UTR区含有mi R-33的结合位点。NRIP1作为一种转录辅抑制因子,通过激活核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路,从而调控炎症因子的表达。因此,我们拟选取NRIP1作为研究的切入点,来探讨mi R-33对LPS刺激的THP-1巨噬细胞炎症应答的调控机制。通过双荧光素酶报告基因技术发现:mi R-33可以有效的抑制NRIP1的3'UTR结合序列的报告基因质粒的荧光素酶活性。此外,我们用RT-PCR及免疫印迹(western blot)方法检测了转染mi R-33mimics后内源性NRIP1的m RNA水平和蛋白水平表达被显著抑制。由此我们可以得出结论,mi R-33通过与NRIP1的3'UTR相互作用,从而抑制其蛋白的表达,最终抑制NRIP1信号通路的活化。结论:1.mi R-33抑制LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性因子分泌,负性调控THP-1巨噬细胞的炎症应答;2.mi R-33通过靶向于NRIP1的3'UTR来抑制NRIP1信号通路的活化,从而负性调控THP-1巨噬细胞的炎症应答。
【关键词】：微小RNA micro RNA-33 脂多糖 ARDS SIRS THP-1巨噬细胞 NRIP1 核转录因子κB
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 前言12-14
• 第2章 miR-33抑制巨噬细胞炎症应14-26
• 2.1 材料方法15-20
• 2.2 结果20-24
• 2.3 讨论24-26
• 第3章 miR-33通过靶向作用于NRIP1抑制巨噬细胞炎症应答26-42
• 3.1 材料方法27-34
• 3.2 结果34-40
• 3.3 讨论40-42
• 第4章 全文小结42-44
• 参考文献44-50
• 综述50-56
• 参考文献53-56
• 硕士期间发表的论文56-58
• 致谢58-59

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本文编号：366215