NF-κB介导MRP8/14诱导的人肺泡上皮A549细胞凋亡

发布时间：2023-12-13 17:40

　　目的:探讨髓样相关蛋白8/14(MRP8/14)对人肺泡上皮A549细胞存活及凋亡的影响,并研究核因子κB(NF-κB)在其中的作用。方法:MRP8/14以不同剂量或刺激时间处理A549细胞,CCK-8法检测其对细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法及间接免疫荧光法检测A549细胞内NF-κB p65蛋白核移位情况;Western blot法检测NF-κB p65蛋白磷酸化水平;使用NF-κB特异性抑制剂Bay 11-7082探讨NF-κB在凋亡过程中的作用。结果:MRP8/14能以剂量和时间依赖的方式影响A549细胞的存活(P<0.05),流式细胞技术检测结果表明MRP8/14处理后A549细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。此外,MRP8/14能够诱导NF-κB p65蛋白发生显著磷酸化,并移位至细胞核中,NF-κB信号通路明显激活,而NF-κB特异性抑制剂Bay 11-7082能够明显抑制MRP8/14诱导的细胞凋亡(P<0.01)。结论:NF-κB在MRP8/14所导致的肺泡上皮细胞凋亡过程发挥了重要作用。

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【文章目录】：
材料和方法
    1 细胞培养
    2 主要试剂
    3 主要方法
        3.1 MRP8/14蛋白制备
        3.2 CCK8法检测细胞活性
        3.3 Annexin-V/PI流式细胞技术检测A549细胞凋亡
        3.4 细胞核内NF-κB p65蛋白水平检测
        3.5 间接免疫荧光检测NF-κB p65入核
        3.6 Western blot法检测NF-κB p65磷酸化水平
    4 统计学处理
结果
    1 MRP8及MRP14蛋白纯化鉴定
    2 MRP8/14对A549细胞活力的影响
    3 MRP8/14对A549细胞凋亡的影响
    4 MRP8/14对A549细胞NF-κB p65入核的影响
    5 MRP8/14对A549细胞NF-κB p65磷酸化水平的影响
    6 NF-κB抑制剂对MRP8/14所致A549细胞凋亡的影响
讨论



本文编号：3873635