类泛素化修饰Neddylation调控巨噬细胞活化在肺纤维化中作用与机制研究

发布时间：2024-03-16 07:28

　　特发性肺纤维化是一种慢性且不可逆的致命性肺部疾病。IPF的主要病理特征为纤维灶的形成,细胞外基质沉积以及肺泡结构破坏,导致病人呼吸衰竭死亡。IPF多发于中老年群体中,预后差,患者的五年生存率低于30%,生存期中位数只有三年。因为病因不明,所以缺乏针对IPF的有效治疗手段,关于IPF发病机制的研究一直是基础研究的难点和热点。因此,探究IPF的发病机制具有重要的意义。普遍认为,肺纤维化是由异常的损伤修复造成的,巨噬细胞作为一种可塑性极强的免疫细胞,可以通过自身活化在肺纤维化发病过程中发挥重要作用。在不同的刺激下,巨噬细胞可以活化成为两种亚型,即经典活化型(Classically activated macrophage,M1)和替代活化型(Alternatively activated macrophage,M2),M1型的巨噬细胞自身可以分泌各种炎症因子,包括TNFα,IL-1β,IL-6等加剧炎性环境,M2型的巨噬细胞能够抑制炎症反应,促进成纤维细胞分化为肌成纤维细胞,促进组织的修复过程。Neddylation是一类新型蛋白质翻译后修饰,是由多种蛋白质大分子构成的具有高维度的、复杂的蛋...

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Abstract
英文缩略词表
1. 引言
2. 材料和试剂
    2.1 主要仪器
    2.2 主要试剂耗材
    2.3 实验室用小鼠,细胞和质粒
    2.4 试剂配置
3. 实验方法
    3.1 小鼠基因型鉴定
    3.2 质粒提取
    3.3 免疫印迹实验(Western blot)
    3.4 实时荧光定量PCR (qPCR)
    3.5 小鼠肺纤维化模型建立
    3.6 小鼠几丁质模型建立
    3.7 提取并诱导小鼠骨髓巨噬细胞(BMDM)
    3.8 流式细胞术
    3.9 细菌吞噬实验
    3.10 细胞免疫荧光
    3.11 免疫共沉淀
    3.12 组织切片HE染色
    3.13 免疫组化染色
    3.14 BCA法测蛋白浓度
    3.15 质粒转化感受态细胞
    3.16 质粒转染293T细胞
4. 实验结果
    4.1 Ubc12在IPF肺组织中高表达
    4.2 Neddylation参与巨噬细胞M2活化过程
    4.3 巨噬细胞Ubc12敲除小鼠构建成功
    4.4 巨噬细胞中Ubc12敲除促进几丁质诱导的M2活化
    4.5 Ubc12敲除对巨噬细胞的吞噬能力没有显著影响
    4.6 Ubc12敲除加重博来霉素诱导的肺纤维化
    4.7 Ubc12参与调控IL-4介导的AKT信号通路
    4.8 SHP2和Nedd8,Cul1存在相互作用
5. 讨论
6. 结论
参考文献
综述
    参考文献
作者简历



本文编号：3929317