IL-10通过P38MAPK信号通路介导IL-1β对肺成纤维细胞ICAM-1的表达

发布时间：2017-05-26 15:15

  本文关键词：IL-10通过P38MAPK信号通路介导IL-1β对肺成纤维细胞ICAM-1的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本研究以大鼠胚肺成纤维细胞为研究对象，通过对其ICAM-1表达水平及P38MAPK磷酸化水平的观察，探究IL-1β通过P38MAPK信号通路对ICAM-1表达水平的影响及IL-10对该影响作用的干预，进一步了解肺纤维化的部分发病机制，，为临床治疗新思路提供依据。 方法：采用组织切块培养技术对Wistar鼠胚肺成纤维细胞进行培养：将临产Wistar孕鼠吸入乙醚麻醉后，立刻取出胎鼠，将胎鼠肺组织取出后修剪为1mm3左右的小块并加入含胎牛血清（20%）的DMEM培养基；培养条件：恒温37℃，95%空气及5%CO2混合气体，湿度饱和，培养4至6小时，一周左右后开始传代，至5-6代后待所培养的肺成纤维细胞贴壁生长且结构特征、外部形态及生长状态基本一致遂进行下一步实验。 首先将实验用肺成纤维细胞以1×105/ml在预先放置有6mm×22mm盖玻片（已消毒）的6孔板中进行接种；之后置于细胞培养箱中孵育至达到细胞80%-100%融合，弃掉原培养液并加入新培养液（不含胎牛血清），进一步培养12小时，待G0期细胞基本同步化时，将实验细胞分为三组，每组6复孔。分组情况：(1)对照组：单纯加入DMEM培养液培养鼠胚肺成纤维细胞，共6小时；(2)IL-1β干预组：加入含IL-1β15ng/ml的培养液培养鼠胚肺成纤维细胞，共6小时；(3) IL-10+IL-1β干预组:加入IL-10l0ng/ml及IL-lβ15ng/ml共同刺激肺成纤维细胞6小时。 以RT-PCR法检测肺成纤维细胞ICAM-1mRNA表达水平，以Western-Blot法检测肺成纤维细胞P38MAPK磷酸化水平。 结果： 1对Wistar胎鼠的原代肺成纤维细胞培养成功 实验以组织切块培养法进行Wistar胎鼠的肺成纤维细胞培养，最后得到比较理想的生长状况较好的肺成纤维细胞实验模型，其细胞间形态较为一致，胞质均匀，胞体丰满，核仁及核分裂相清晰可见。 2RT-PCR法对肺成纤维细胞中ICAM-1mRNA表达水平的测定 ICAM-1mRNA电泳条带的光密度扫描显示：对照组的肺成纤维细胞中ICAM-1mRNA有一定量的基础表达，但其表达量较低，为（0.361±0.045）； IL-1β干预组的ICAM-1mRNA的表达量为（0.848±0.039），与对照组相比明显升高（P0.01）； IL-10+IL-1β联合干预组ICAM-1mRNA的表达量为（0.740±0.026），明显低于IL-1β干预组的表达量（P0.01），但与对照组相比其表达量有所升高（P0.01）。 3WesternBlot法测定肺成纤维细胞P-P38蛋白表达水平的变化 磷酸化P38(P-P38)蛋白在肺成纤维细胞中存在基础表达,对照组为(0.581±0.034)；IL-lβ干预组P-P38蛋白表达为(1.196±0.038),明显高于对照组(P0.01)；IL-10+IL-lβ联合干预组P-P38蛋白表达为(0.780±0.028),明显低于IL-1β干预组(P 0.01),但高于对照组,具有统计学意义(P 0.01)。 结论： 1正常的肺成纤维细胞中ICAM-1表达量较低； 2IL-1β可以上调肺成纤维细胞ICAM-1的表达，使其显著上升，这种作用可能通过对P38MAPK通路的上调实现； 3IL-10可能通过抑制IL-1β对P38MAPK的上调作用而抑制其对肺成纤维细胞ICAM-1的表达的刺激。
【关键词】：肺成纤维细胞 IL-10 IL-1β ICAM-1 P38MAPK
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-10
• 材料与方法10-20
• 结果20-21
• 附图21-22
• 附表22-23
• 讨论23-27
• 结论27-28
• 参考文献28-33
• 综述 白细胞介素－10 与呼吸系统疾病33-49
• 参考文献41-49
• 致谢49-50
• 个人简历50

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