骨髓间充质干细胞移植对博莱霉素致肺纤维化小鼠干预效应的研究

发布时间：2017-05-26 16:16

  本文关键词：骨髓间充质干细胞移植对博莱霉素致肺纤维化小鼠干预效应的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对博莱霉素致肺纤维化小鼠的干预效应并探讨其治疗肺纤维化的作用机制。 方法：体外分离及培养6-8周龄雄性ICR小鼠的骨髓间充质干细胞。150只6-8周龄雌性ICR小鼠随机分为如下3组，即：阴性对照组(NC组)，阳性对照组(PC组)，BMSCs干预组。NC组于气管内注入PBS50ul，PC组及BMSCs干预组按6ug/g剂量经鼻气管内滴入博莱霉素50ul一次性给药制备肺纤维化模型，BMSCs组于造模后24小时经尾静脉注射MSC1×107/ml，200ul。各组小鼠分别于造模后第3、7、14、28天处死5只小鼠，处死前称取小鼠体重，处死后称取肺组织湿重并留取肺组织行HE、MASSON染色及羟脯氨酸含量测定；提取肺组织的DNA检测雄鼠的性别决定基因(Sry基因)；提取肺组织RNA以检测SP-CmRNA、AQP5mRNA表达情况。 结果：1、肺系数：PC组及BMSCs组各时间点肺系数均较NC组稍高，但除第3天外，BMSCs组较PC组明显降低。2、肺组织病理：BMSCs组在第7天以后肺泡炎较PC组明显减轻，第14天以后肺纤维化程度较PC组明显减轻。3、HYP含量：第3、7天三组HYP含量无明显差异，14天、28天时PC组与BMSCs干预组均较NC组升高，但BMSCs干预组低于PC组。4、sry基因检测：BMSCs干预组各时间点均可以检测到雄性小鼠的sry基因。5、肺组织SP-C mRNA表达情况：PC组及BMSCs干预组在各时间点的SP-C mRNA表达均低于NC组，除第7天外，BMSCs干预组SP-C mRNA表达量相对PC组更高。6、肺组织AQP5mRNA表达情况：PC组及BMSCs干预组在各时间点的AQP5mRNA表达均低于NC组,与PC组相比，BMSCs干预组在各时间点的AQP5mRNA表达均较PC组高。 结论：1、经尾静脉注射的外源性BMSCs可以到达博莱霉素诱导肺纤维化小鼠的肺组织并在局部定植，，且能在局部发挥抗炎、抗纤维化的干预作用；2、外源性BMSCs发挥抗炎、抗纤维化的机制可能是通过在局部分化成为肺泡上皮细胞并增加SP-C、AQP5的表达量从而达到恢复肺干细胞库、修复肺损伤的目的。
【关键词】：特发性肺纤维化 骨髓间充质干细胞 羟脯氨酸 小鼠性别决定基因 肺泡表面活性蛋白-C 水通道蛋白5
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 实验材料11-13
• 2.1 实验动物11
• 2.2 实验仪器11
• 2.3 实验试剂11-12
• 2.4 常用耗材12-13
• 第3章 实验方法与步骤13-22
• 3.1 器材的灭菌、去 RNA 酶处理13
• 3.2 体外分离培养 BMSCs 及其鉴定13-15
• 3.2.1 分离培养13
• 3.2.2 细胞传代13-14
• 3.2.3 细胞鉴定14-15
• 3.3 BMSCs 移植入博莱霉素肺损伤小鼠体内实验15-21
• 3.3.1 动物模型的制备15
• 3.3.2 实验分组15-16
• 3.3.3 小鼠一般情况的记录及标本收集16
• 3.3.4 肺组织病理学检测16-17
• 3.3.5 肺组织羟脯氨酸测定17-18
• 3.3.6 肺组织总 RNA 的提取及 SP-C、AQP 5 转录水平荧光定量 PCR 检测18-19
• 3.3.7 肺组织 DNA 的提取及小鼠肺组织细胞来源检测19-21
• 3.4 统计学方法21-22
• 第4章 结果22-31
• 4.1 小鼠 BMSCs 生长特点及鉴定结果22-24
• 4.2 BMSCs 移植入博莱霉素肺损伤小鼠体内实验情况24-31
• 4.2.1 各实验组小鼠一般情况、死亡情况及肺系数变化24-25
• 4.2.2 肺组织病理学检查25-28
• 4.2.3 肺组织羟脯氨酸含量测定28
• 4.2.4 小鼠 Y 染色体性别决定区 Sry 基因的检测28-29
• 4.2.5 SP-C mRNA 表达变化情况29-30
• 4.2.6 AQP5 mRNA 表达变化情况30-31
• 第5章 讨论31-37
• 第6章 结论与展望37-38
• 6.1 结论37
• 6.2 展望37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-42
• 攻读学位期间的研究成果42-43
• 综述43-48
• 参考文献47-48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：397415