香烟烟雾对人气道平滑肌细胞增殖和凋亡失衡的影响及机制研究

发布时间：2025-01-04 05:21

　　目的 1.观察在不同浓度及时间的香烟烟雾作用下,人气道平滑肌细胞增殖和凋亡的变化趋势; 2.探讨香烟烟雾促进人气道平滑肌细胞增殖/凋亡失衡是否通过线粒体凋亡途径或死亡受体途径进行,及是否受Bcl-2家族和TNFR超家族的调控; 3.探讨在香烟烟雾作用下,人气道平滑肌细胞中ROS的变化是否调控细胞周期调控因子NF-κB的表达,进而影响平滑肌细胞的增殖和凋亡。 材料与方法 本实验采用组织块贴壁法原代培养人气道平滑肌细胞(HASMCs),用胰蛋白酶消化法传代细胞,并将HASMCs随机分成4个时间干预组:2.5%CSE、5%CSE、10%CSE和20%CSE组,3个时间干预组:24小时、48小时和72小时组及对照组。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学染色法检测不同组细胞的增殖程度和活性情况。AO/EB荧光染色和流式细胞术分别检测细胞凋亡的形态学变化和细胞周期动力学变化。运用实时荧光定量聚合酶链反应(Realtime- PCR)检测不同浓度和时间CSE作用下Bcl-2、Bax、Bad、Fas、FasL和NF-κB在mRN...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1肺动脉平滑肌细胞呈梭形，相互融合，

图1肺动脉平滑肌细胞呈梭形，相互融合，图2免疫组化表明PASMC中α-actin呈现“峰和谷”生长(相差显微镜×100)表达阳性（SP×400）Fig.1HASMCsappearedspindle-shaped,Fig.2Positiveexp....

图2免疫组化表明PASMC中α-actin呈现“峰和谷”生长(相差显微镜×100)表达阳性（SP×400）

图1肺动脉平滑肌细胞呈梭形，相互融合，图2免疫组化表明PASMC中α-actin呈现“峰和谷”生长(相差显微镜×100)表达阳性（SP×400）Fig.1HASMCsappearedspindle-shaped,Fig.2Positiveexp....

图3HASMC中PCNA蛋白的表达（SP×200）

DE图3HASMC中PCNA蛋白的表达（SP×200）A.对照组；B.2.5%CSE组；C.5%CSE组；D.10%CSE组；E.20%CSE组Fig.3ExpressionofPCNAproteininHASMC.(SP×200)A.control;B.....

图4不同浓度香烟烟雾作用24小时凋亡和坏死气道平滑肌细胞AO/EB染色（SP×200）

29图4不同浓度香烟烟雾作用24小时凋亡和坏死气道平滑肌细胞AO/EB染色（SP×200）A．对照组；B．2.5%CSE组;C．5%CSE组;D．10%CSE组;E．20%CSE组Figure4Demonstrationofapoptosisa....

本文编号：4022965