LOX-1在高氧诱导急性肺损伤中的作用及其机制

发布时间：2017-06-09 23:05

  本文关键词：LOX-1在高氧诱导急性肺损伤中的作用及其机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景在对早产儿、重症病人和呼吸衰竭患者的临床治疗和监护中,常常需要机械通气补给高浓度的氧气。但是长期暴露于高氧环境中可引起多器官损伤,特别是肺损伤。高氧诱导的急性肺损伤主要以肺部炎症反应的过度激活和细胞凋亡为主要特征,最终可发展为急性呼吸窘迫综合征。 凝集素样氧化性低密度脂蛋白受体1(LOX-1)是氧化性低密度脂蛋白的天然受体,主要在内皮细胞表达,是细胞摄取和代谢氧化性低密度脂蛋白的主要受体。LOX-1在血管炎症中作用的研究已较为明确,通过介导炎症反应和内皮细胞功能不全促进动脉粥样硬化的发生发展。已有文献报道,LOX-1介导脂多糖诱导的急性肺损伤。本实验拟探讨LOX-1是否介导高氧诱导的急性肺损伤及其机制。 方法动物实验：小鼠在95%02的高氧舱内饲养72h建立急性肺损伤模型。雄性C57BL6小鼠(6-8周)20只,随机分为2组,每组10只：对照组和高氧模型组。经支气管行肺泡灌洗术,收集肺泡灌洗液,测定其细胞总数、蛋白浓度以及肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和白介素6(IL-6)水平；测定肺组织Caspase3活性以及LOX-1、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的蛋白表达水平；HE染色进行肺组织形态学分析。 细胞实验：实验设对照组、高氧模型组、高氧+LOX-1RNA干扰组、高氧+RNA干扰阴性对照。MTS法检测细胞活力；测定细胞上液清中乳酸脱氢酶释放量以及肿瘤坏死TNF-α和IL-6水平；检测LOX-1以及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的蛋白表达。 结果 1.与正常对照组相比,高氧诱导的急性肺损伤小鼠体重明显减轻,肺泡灌洗液中总细胞数、蛋白浓度及TNF-α、IL-6水平显著升高。 2.与正常对照组相比,高氧模型组小鼠肺组织中caspase3活性升高,LOX-1、Bax蛋白表达水平明显上调,Bcl-2蛋白表达水平下调。 3.与正常对照组相比,高氧模型组细胞活力明显下降,培养液上清中LDH释放量、炎症因子TNF-α和IL-6水平显著上升。 4.与正常对照组相比,高氧模型组A549细胞中LOX-1、Bax蛋白表达水平明显上调,Bcl-2蛋白表达水平下调。 5.干扰LOX-1基因表达可以抑制高氧引起的A549细胞损伤以及促凋亡蛋白表达升高和炎症因子释放增加。 结论LOX-1介导高氧诱导的急性肺损伤,其机制与LOX-1促炎、促凋亡作用有关。
【关键词】：高氧 急性肺损伤 LOX-1 炎症 凋亡
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 专业名词缩写中英文对照表11-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 材料与方法15-24
• 2.1 试剂与仪器15-17
• 2.1.1 主要试剂15-16
• 2.1.2 主要仪器16-17
• 2.2 方法17-23
• 2.2.1 动物造模及分组17
• 2.2.2 细胞培养和分组17-18
• 2.2.3 组织标本收集18
• 2.2.4 组织形态学分析18-19
• 2.2.5 支气管肺泡灌洗液制备19
• 2.2.6 支气管肺泡灌洗液中细胞总数计数19
• 2.2.7 支气管肺泡灌洗液中总蛋白度浓度测定19
• 2.2.8 炎症因子水平测定19-20
• 2.2.9 肺组织Caspase 3活性检测20-21
• 2.2.10 肺组织和细胞总蛋白提取21
• 2.2.11 Western Blot检测蛋白表达21-22
• 2.2.12 细胞活力测定22
• 2.2.13 细胞LDH释放量测定22-23
• 2.3 统计学分析23-24
• 第三章 结果24-32
• 3.1 肺组织HE染色及分析24
• 3.2 小鼠肺泡灌洗液成分分析24
• 3.3 高氧对小鼠一般情况、体重和肺部凋亡指标的影响24
• 3.4 肺组织LOX-1蛋白表达水平24
• 3.5 高氧对A549细胞活力和LOX-1蛋白表达的影响24
• 3.6 LOX-1对高氧诱导A549细胞炎症反应的影响24-25
• 3.7 LOX-1对高氧诱导的A549细胞凋亡的影响25-26
• 附图26-32
• 第四章 讨论32-34
• 第五章 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述38-51
• 参考文献46-51
• 攻读硕士学位期间主要研究成果51-52
• 致谢52

【共引文献】

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本文编号：436860