舒林酸抗肺纤维化的作用及其对STAT3相关miR-21表达抑制

发布时间：2017-07-13 11:00

  本文关键词：舒林酸抗肺纤维化的作用及其对STAT3相关miR-21表达抑制

  更多相关文章： 肺纤维化 舒林酸 STAT3 IFN-γ EMT miR-21

【摘要】：目的：探讨舒林酸(sulindac)通过抑制IFN-y诱导的STAT3/p-STAT3通路相关miRNA-21表达缓解肺纤维化损伤的机制。方法：用博莱霉素诱导构建大鼠肺纤维化模型,转化生长因子(TGF-1)诱导A549细胞发生上皮间充质转化(EMT)构建肺纤维化细胞模型,用舒林酸、IFN-γ、AG490干预及miR-21转染。倒置显微镜、激光扫描共聚焦显微镜观察细胞形态及E-cadherin、α-SMA的表达；western blot检测EMT标志性蛋白E-cadherin、α-SMA和Stat3/p-Stat3的表达变化；IHC、ELISA检测IFN-γ表达；RT-qPCR检测miR-21表达。结果：舒林酸治疗组大鼠肺干湿比、肺泡间隔增宽、胶原沉积等指标较博莱霉素诱导肺纤维化模型组减弱。舒林酸抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT形态学变化,且上调E-cadherin表达,下调a-SMA表达逆转EMT。舒林酸减弱肺纤维化中IFN-Y表达；IFN-γ以剂量依赖方式上调Stat3及p-Stat3表达；舒林酸下调Stat3及p-Stat3表达；舒林酸抑制IFN-γ诱导的STAT3信号通路。miR-21是STAT3信号通路下游miRNA;舒林酸下调miR-21表达; IFN-γ上调miR-21表达；miR-21诱导A549细胞发生EMT形态学变化,且下调E-cadherin表达,上调α-SMA表达促EMT；舒林酸抑制miR-21诱导的A549细胞EMT形态学变化,且上调E-cadherin表达,下调a-SMA表达逆转EMT。结论：舒林酸缓解肺纤维化发生,可能与抑制IFN-γ诱导的STAT3/p-STAT3信号通路的活化进而下调通路下游miR-21表达有关。
【关键词】：肺纤维化 舒林酸 STAT3 IFN-γ EMT miR-21
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563.9
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-16
• 参考文献11-16
• 第一部分 探讨舒林酸是否具有抗肺纤维化作用16-30
• Part1 舒林酸在BLM诱导大鼠肺纤维化损伤中的作用16-25
• 1 实验材料16-17
• 1.1 实验动物16
• 1.2 主要实验试剂16
• 1.3 主要仪器16
• 1.4 常用试剂配制16-17
• 2 实验方法17-22
• 2.1 动物模型分组与模型制备17-18
• 2.2 动物模型取材18
• 2.3 石蜡切片制备18
• 2.4 HE染色18-19
• 2.5 Masson染色19
• 2.6 羟脯氨酸检测19-20
• 2.7 Western blotting检测E-cadherin、α-SMA的表达变化20-22
• 3 统计分析22
• 4 实验结果22-25
• 4.1 HE染色观察大鼠肺组织形态改变22
• 4.2 Masson染色观察大鼠肺组织的胶原表达22-23
• 4.3 大鼠肺组织胶原的定量表达23
• 4.4 大鼠肺组织HYP含量检测23-24
• 4.5 Western blotting检测sulindac对大鼠肺组织E-cadherin、a-SMA表达影响24-25
• Part2 舒林酸逆转A549细胞的EMT过程25-30
• 1 实验材料25-26
• 1.1 细胞系25
• 1.2 主要实验试剂25
• 1.3 主要仪器25
• 1.4 常用试剂配制25-26
• 2 实验方法26-27
• 2.1 A549细胞复苏、培养、传代及冻存26
• 2.2 细胞加药实验26-27
• 3 统计分析27
• 4 实验结果27-30
• 4.1 Western blotting检测TGF-β1诱导的A549细胞E-cadherin、a-SMA表达变化27
• 4.2 A549细胞sulindac干预后细胞形态学观察27-28
• 4.3 Western blotting检测A549细胞sulindac干预后E-cadherin、α-SMA表达变化28-30
• 第二部分 探讨舒林酸抗肺纤维化的可能机制30-53
• Part1 舒林酸对肺纤维化中IFN-γ表达的影响30-36
• 1 实验材料30
• 1.1 实验动物30
• 1.2 细胞系30
• 1.3 主要实验试剂30
• 1.4 主要仪器30
• 1.5 常用试剂配制30
• 2 实验方法30-32
• 2.1 动物模型分组与模型制备31
• 2.2 动物模型取材31
• 2.3 石蜡切片制备31
• 2.4 免疫组化31-32
• 2.5 Western blotting检测IFN-γ因子的表达变化32
• 2.6 A549细胞复苏、培养、传代及冻存32
• 2.7 细胞加药实验32
• 2.8 酶联免疫吸附实验32
• 3 统计分析32
• 4 实验结果32-36
• 4.1 IHC观察sulindac对大鼠肺组织IFN-γ表达影响32-33
• 4.2 IHC检测sulindac对大鼠肺组织IFN-γ表达影响的IOD分析33-34
• 4.3 Western Blotting检测sulindac对大鼠肺组织IFN-γ表达影响34
• 4.4 ELISA检测sulindac对A549细胞IFN-γ表达的影响34-36
• Part2 舒林酸对IFN-γ诱导的STAT3信号通路的抑制36-40
• 1 实验材料36
• 1.1 实验动物36
• 1.2 细胞系36
• 1.3 主要实验试剂36
• 1.4 主要仪器36
• 1.5 常用试剂配制36
• 2 实验方法36-37
• 2.1 动物模型分组与模型制备36
• 2.2 动物模型取材36
• 2.3 A549细胞复苏、培养、传代及冻存36-37
• 2.4 细胞加药实验37
• 2.5 Western blotting检测stat3、P-stat3的表达变化37
• 3 统计分析37
• 4 实验结果37-40
• 4.1 Western Blotting检测sulindac对大鼠肺组织stat3、P-stat3表达影响37
• 4.2 Western Blotting检测IFN-γ干预的A549细胞stat3、P-stat3表达改变37-38
• 4.3 Western Blotting检测IFN-γ、AG490干预的A549细胞stat3、P-stat3表达改变38
• 4.4 Western Blotting检测sulindac、AG490干预的A549细胞stat3、P-stat3表达改变38-40
• Part3 miR-21对A549细胞的EMT的影响40-44
• 1 实验材料40
• 1.1 细胞系40
• 1.2 主要实验试剂40
• 1.3 主要仪器40
• 1.4 常用试剂配制40
• 2 实验方法40-41
• 2.1 A549细胞复苏、培养、传代及冻存40
• 2.2 miRNA化学合成40
• 2.3 细胞转染实验40-41
• 2.4 Western blotting检测E-cadherin、a-SMA的表达变化41
• 3 统计分析41
• 4 实验结果41-44
• 4.1 A549细胞miR-21转染后细胞形态学观察41-42
• 4.2 Western blotting检测A549细胞miR-21转染后E-cadherin、α-SMA表达变化42-44
• Part4 舒林酸减弱STAT3信号通路相关miR-21的表达44-49
• 1 实验材料44
• 1.1 实验动物44
• 1.2 细胞系44
• 1.3 主要实验试剂44
• 1.4 主要仪器44
• 1.5 常用试剂配制44
• 2 实验方法44-46
• 2.1 动物模型分组与模型制备44
• 2.2 动物模型取材44
• 2.3 A549细胞复苏、培养、传代及冻存44
• 2.4 细胞加药实验44-45
• 2.5 组织及细胞RNA提取45
• 2.6 miR-21的加尾及反转录45-46
• 2.7 PCR反应46
• 3 统计分析46
• 4 实验结果46-49
• 4.1 QRT-PCR检测sulindac对大鼠肺组织miR-21表达影响46-47
• 4.2 QRT-PCR检测IFN-γ、AG490干预的A549细胞miR-21表达改变47
• 4.3 QRT-PCR检测sulindac、AG490干预的A549细胞miR-21表达改变47-49
• Part5 舒林酸抑制miR-21诱导的EMT49-53
• 1 实验材料49
• 1.1 细胞系49
• 1.2 主要实验试剂49
• 1.3 主要仪器49
• 1.4 常用试剂配制49
• 2 实验方法49-50
• 2.1 A549细胞复苏、培养、传代及冻存49
• 2.2 细胞加药实验49
• 2.3 Western blotting检测E-cadherin、a-SMA的表达变化49-50
• 2.4 Immunofluorescence检测E-cadherin、a-SMA的表达变化50
• 3 统计分析50
• 4 实验结果50-53
• 4.1 A549细胞sulindac及miR-21干预后细胞形态学观察50
• 4.2 Western blotting检测A549细胞sulindac及miR-21干预后E-cadherin、α-SMA表达变化50-51
• 4.3 Immunofluorescence检测A549细胞sulindac及miR-21干预后E-cadherin、α-SMA表达变化51-53
• 讨论53-55
• 参考文献55-57
• 文献综述 γ干扰素在特发性肺纤维化中的相关研究进展57-65
• 1 IFN-γ概述58
• 2 IFN-γ与IPF相关信号通路58-59
• 3 IFN-γ与IPF相关miRNA表达59-60
• 4 IFN-γ与IPF过程中血管再生60
• 5 IFN-γ与Th1/Th2型细胞因子平衡60-61
• 6 IFN-γ治疗IPF的探索61-62
• 参考文献62-65
• 致谢65-66
• 研究生期间发表的文章66

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本文编号：536626