β-catenin蛋白敲除对肺成纤维细胞活性影响的实验研究

发布时间：2017-08-07 19:03

  本文关键词：β-catenin蛋白敲除对肺成纤维细胞活性影响的实验研究

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【摘要】：目的： 通过在肺成纤维细胞内转染F-TrCP-Ecad质粒，观察β-catenin蛋白敲除对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞（CCC-REPF-1）活性的影响，探讨β-catenin信号通路在TGF-β1诱导的肺成纤维细胞活化中的作用及其机制。 方法： 体外培养大鼠肺成纤维细胞（CCC-REPF-1），分为正常组、TGF-β1刺激组、pcDNA3转染加TGF-β1组、F-TrCP-Ecad加TGF-β1组。各组细胞TGF-β1(5ng/mL)刺激48h后，光镜下观察各组肺成纤维细胞细胞形态学的改变；收集细胞采用CCK-8法观察各组肺成纤维细胞增殖情况；Western印迹法检测各组细胞中α-SMA、Fn、E-cadherin的表达；采用RT-PCR技术检测β-catenin途径下游转录产物α-SMA，colⅠ,colⅢ表达。 结果： 1、光镜下观察肺成纤维细胞：成纤维细胞呈梭型，有较长的突起，胞核呈卵圆形，位于细胞中央，成放射状和栅栏状排列。TGF-β1刺激后，细胞体积明显增大，胞突消失，细胞数量明显增多，细胞间隙变小。F-TrCP-Ecad转染组大部分细胞呈梭型，有较长的突起，细胞间有明显间隙。 2、CCK-8法观察各组肺成纤维细胞增殖：与正常组比较, TGF-β1刺激组、pcDNA3转染加TGF-β1组其OD值明显增高，两组比较无统计学差异；F-TrCP-Ecad转染组OD值较TGF-β1刺激组明显减低(P＜0.01)，与正常组比较无统计学差异。 3、Western印迹法检测各组细胞中α-SMA、Fn、E-cadherin的表达：与正常组比较, TGF-β1刺激组、pcDNA3转染组其α-SMA、Fn蛋白表达显著升高, E-cadherin表达显著降低(P＜0.01)，两组比较无统计学差异；F-TrCP-Ecad转染组较TGF-β1刺激组α-SMA、Fn蛋白表达显著降低，E-cadherin表达显著升高(P＜0.01)，与正常组比较无统计学差异。 4、荧光实时定量RT-PCR检测α-SMA，colⅠ,colⅢ表达：与正常组比较, TGF-β1刺激组、pcDNA3转染组β-catenin途径α-SMA，colⅠ,colⅢmRNA表达增高(P＜0.01)；两组比较无统计学差异，F-TrCP-Ecad转染组较TGF-β1刺激组α-SMA，colⅠ,colⅢ表达降低(P＜0.01)，，与正常组比较无统计学差异。 结论： 1、TGF-β1是促进肺成纤维细胞增殖、活化的重要细胞因子，β-catenin途径是TGF-β1发挥作用的重要信号通路。 2、β-catenin蛋白敲除载体（F-TrCP-Ecad质粒）通过阻断该信号途径，阻断成纤维细胞转化为其活性形式肌成纤维细胞，同时抑制成纤维细胞释放胞外基质，阻断纤维化进程。
【关键词】：TGF-β1 肺成纤维细胞 β-catenin 蛋白敲除 F-TrCP-Ecad质粒
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文词汇缩略表9-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-20
• 结果20-23
• 讨论23-26
• 结论26-27
• 参考文献27-29
• 综述29-37
• 参考文献34-37
• 个人简介37-38
• 致谢38

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：636195