LXRs在LPS诱导THP-1巨噬细胞微粒产生中的作用及机制

发布时间：2017-08-10 21:01

  本文关键词：LXRs在LPS诱导THP-1巨噬细胞微粒产生中的作用及机制

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【摘要】：研究背景:ALI/ARDS是临床上常见的危重症,过度的炎症反应是ALI/ARDS的特征性表现之一,微粒是炎症反应的重要生物学标志物,在ALI/ARDS的发生发展中起着重要作用。巨噬细胞在ALI/ARDS时迅速增加,并且对其产生重要影响。肝X受体能够减轻ALI/ARDS及其炎症反应,但是其具体机制尚不清楚,进一步研究其机制对于ALI/ARDS的防治具有重要意义。目的:通过体外细胞实验,观察肝X受体在LPS诱导的THP-1巨噬细胞微粒产生过程中的作用以及微粒浓度与THP-1巨噬细胞炎性反应的关系。方法:1、先用PMA 100 nM刺激THP-1巨噬细胞贴壁,更换新鲜培养基再用LXRs激动剂T0901317(0μM、5μM、10μM、20μM)预处理THP-1巨噬细胞,6h后更换新鲜培养基,然后用0.1μg/ml的LPS培养细胞24h,采用western blot免疫印迹检测TLR4蛋白的表达、ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β的表达和微粒浓度(以磷脂酰丝氨酸浓度表示)。2、先用PMA 100 nM刺激THP-1巨噬细胞贴壁,更换新鲜培养基再用LXRs激动剂T0901317(10μM)预处理THP-1巨噬细胞(0h、6h、12h、24h),再次更换新鲜培养基后用0.1μg/ml的LPS培养细胞24h,采用western blot免疫印迹检测TLR4蛋白的表达、ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β的表达和微粒浓度(以磷脂酰丝氨酸浓度表示)。3、先用PMA 100 nM刺激THP-1巨噬细胞贴壁,更换新ii鲜培养基后将thp-1巨噬细胞分别进行空白对照处理、lxrs激动剂(10μm)处理、tlr4抑制剂tak-242(3μm)处理,6h后再次更换新鲜培养基,用0.1μg/ml的lps培养细胞24h,采用westernblot免疫印迹检测tlr4蛋白的表达、elisa检测tnf-α、il-6、il-1β和微粒浓度(以磷脂酰丝氨酸浓度表示)。结果:1、lxrs激动剂t0901317能显著抑制thp-1巨噬细胞tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β的表达以及微粒的产生,并具有浓度依赖关系。与0μm组相比,lxrs激动剂t0901317在5μm时即有显著作用,且随着lxrs激动剂浓度增加抑制作用也增强,20μm组lxrs激动剂对tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β的表达以及微粒的产生抑制作用最为显著(p0.001)。2、lxrs激动剂t0901317能显著抑制thp-1巨噬细胞tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β的表达以及微粒的产生,并且在24h内具有时间依赖关系。与0h组相比,lxrs激动剂t090131710μm处理6h时即有显著作用,且随着lxrs激动剂作用时间延长抑制作用也增强,24h组lxrs激动剂对tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β的表达以及微粒的产生抑制最为显著(p0.001)。3、thp-1巨噬细胞微粒浓度与tlr4蛋白表达水平以及tnf-α、il-6、il-1β浓度呈正相关。4、tlr4抑制剂tak-242和lxrs激动剂t0901317都能有效抑制tlr4蛋白、tnf-α、il-6、il-1β表达以及微粒产生,且tlr4抑制剂tak-242较lxrs激动剂t0901317作用更明显。结论:1、lxrs激动剂在lps诱导thp-1巨噬细胞的微粒产生中起抑制作用。2、lxrs可能通过tlr4/myd88通路调节lps诱导的thp-1巨噬细胞微粒产生来调节巨噬细胞的炎症反应。
【关键词】：急性肺损伤 微粒 LXRs TLR-4 炎性反应
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 实验材料16-18
• 2.1 实验细胞16
• 2.2 主要试剂16
• 2.3 主要仪器设备16-18
• 第3章 实验方法18-24
• 3.1 细胞的培养18
• 3.2 实验分组和方法18-23
• 3.3 统计学分析23-24
• 第4章 实验结果24-32
• 第5章 讨论32-36
• 第6章 结论36-38
• 参考文献38-42
• 附录42-44
• 文献综述44-54
• 参考文献50-54
• 作者攻读学位期间的科研成果54-56
• 致谢56

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本文编号：652630