气道酸性微环境下OGR1介导黏蛋白5AC表达的研究

发布时间：2017-09-11 16:04

  本文关键词：气道酸性微环境下OGR1介导黏蛋白5AC表达的研究

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【摘要】：目的明确酸性微环境诱导下气道上皮细胞OGR1蛋白表达情况，研究OGR1蛋白、ERK蛋白在酸性微环境诱导下气道黏蛋白5AC高表达中的作用，并就酸性微环境与OGR1/ERK之间的关系做初步探讨。 方法 （1）体外培养人气道上皮细胞（16HBE），以氯化氢创造细胞酸性环境（pH6.4），，以细胞外信号调节激酶（ERK）特异性抑制剂PD88059及卵巢癌G蛋白偶联受体1（OGR1） siRNA进行干预，将细胞随机分为8组： ①对照组 ②酸刺激组 ③酸刺激+转染OGR1siRNA组 ④pH7.4+OGR1siRNA组 ⑤酸刺激+阴性siRNA组 ⑥pH7.4+阴性siRNA组 ⑦酸刺激+PD98059组 ⑧pH7.4+PD98059组 （2）采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞活性，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定各组细胞黏蛋白(MUC)5AC转录水平，酶联免疫反应(ELISA)法观察细胞黏蛋白5AC裂解液中MUC5AC蛋白水平的改变； （3）Western blot法检测OGR1蛋白及p-ERK蛋白的相对含量。 结果 （1）酸刺激组内细胞黏蛋白(MUC)5AC转录及蛋白水平显著高于对照组（p值均0.05），其OGR1及p-ERK蛋白含量较对照组亦明显增加。 （2）酸刺激+转染OGR1siRNA组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组（p值均0.05），其p-ERK含量亦明显降低。而pH7.4+OGR1siRNA组MUC5AC蛋白含量及mRNA水平较pH7.4对照组无明显差别，其p-ERK含量也变化不大。 （3）酸刺激+PD98059组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组（p值均0.05），而pH7.4+PD98059组较对照组MUC5ACmRNA转录及蛋白水平无明显差异。 结论 （1）在酸性微环境条件下，支气管上皮细胞OGR1表达明显增高，ERK磷酸化水平明显上升。 （2）转染OGR1siRNA抑制其功能表达后气道上皮细胞黏蛋白5AC mRNA转录水平及蛋白表达水平明显降低，ERK的磷酸化也明显减弱。 （3）本实验提示OGR1可能通过激活ERK信号通路参与气道酸性微环境所致的人气道粘膜上皮细胞黏蛋白5AC表达。
【关键词】：黏蛋白 酸性环境 卵巢癌G蛋白偶联受体1 细胞外信号调节激酶
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R56
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-13
• 1 材料与方法13-16
• 1.1 材料13
• 1.2 细胞培养及分组13-14
• 1.3 四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞活力14
• 1.4 细胞转染14
• 1.5 ELISA 法测上清液 MUC5AC 蛋白含量14-15
• 1.6 逆转录 PCR 检测 MUC5AC mRNA15
• 1.7 Western 印迹分析蛋白含量15
• 1.8 统计学分析15-16
• 2 结果16-21
• 2.1 四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞活力16
• 2.2 转染 16HBE 细胞表达情况的鉴定16-17
• 2.3 MUC5AC mRNA 转录水平及细胞培养上清液中 MUC5AC 分泌水平17-18
• 2.4 酸性刺激及 PD98059 处理对 p-ERK 及 MUC5AC 蛋白及 mRNA 水平影响18-19
• 2.5 酸刺激及转染 OGR1 siRNA 对 p-ERK 蛋白含量影响19-21
• 3 讨论21-23
• 4 参考文献23-25
• 全文总结25-26
• 文献综述26-35
• 参考文献32-35
• 致谢35-36
• 硕士期间发表的论文36-37

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本文编号：831692