IRAK-M在哮喘中的免疫调节作用及变应性支气管肺曲菌病患者临床特征分析

发布时间：2017-09-11 16:13

  本文关键词：IRAK-M在哮喘中的免疫调节作用及变应性支气管肺曲菌病患者临床特征分析

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【摘要】：目的：探索IRAK-M在哮喘动物模型中对Th2炎症的影响,及其对树突状细胞、巨噬细胞及CD4+T细胞功能作用。方法：1)哮喘模型：使用雌性IRAK-M-/-及野生型小鼠建立OVA致敏的急性及慢性持续哮喘模型；使用RT-PCR及免疫组化检测野生型哮喘模型小鼠中IRAK-M mRNA及蛋白表达的变化；气管插管检测两组哮喘小鼠气道高反应性,ELISA检测血清总IgE,肺病理HE染色,流式细胞术检测BALF炎性细胞分类及多因子检测细胞因子、肺及脾脏Th细胞亚群、肺DC及肺泡巨噬细胞表面共刺激分子等免疫指标。2)细胞实验：免疫磁珠分离IRAK-M-/-的及野生型小鼠脾脏naive CD4+T细胞后行增殖实验及诱导分化实验；提取两组小鼠骨髓细胞诱导分化BMDC及BMDM细胞,经LPS及OVA刺激后检测其表面共刺激分子变化；将IRAK-M-/-的及野生型小鼠来源的BMDC/BMDM (OVA刺激24h)与正常naive CD4+T细胞混合培养后检测T细胞亚群分化。3)细胞移植实验：将IRAK-M-/-及野生型BMDC/BMDM(OVA呈递24h)分别经鼻滴入野生型小鼠,以观察两组哮喘程度。结果：1) IRAK-M在哮喘肺部显著增高；较之野生型急性哮喘小鼠,IRAK-M-/-急性哮喘小鼠气道高反应性、肺部炎性浸润细胞、BALF炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞百分比、IL-4、IL-13等细胞因子、Th2及Th17细胞百分比浓度显著增高,而Treg百分比显著降低；2) IRAK-M-/-哮喘小鼠肺中上皮来源促炎分泌细胞因子IL-33、TSLP显著增多,而IL-25显著变化。3)与野生型小鼠来源naive CD4+T细胞相比,IRAK-M-/-来源naive CD4+T细胞增殖无显著差异,但更易于向Th17分化,而Treg分化减少。4) IRAK-M-/-哮喘小鼠肺DC细胞及巨噬细胞促炎共刺激分子表达增多,IRAK-M缺失可致BMDC/BMDM促炎共刺激分子上调、更易促进naive CD4+T细胞向促炎性Th亚群分化。5) IRAK-M-/- BMDC/BMDM细胞移植哮喘小鼠较对照组哮喘炎症更重。结论：IRAK-M表达在哮喘肺组织总显著增高,且IRAK-M缺失可影响气道上皮细胞、 CD4+T细胞、DC细胞及巨噬细胞多种途径从而加重哮喘炎症。目的：总结变应性支气管肺曲菌病(ABPA)患者的临床特征,增强对ABPA的临床特点认识,以早期诊治。方法：回顾性分析了1996年1月至2015年7月北京协和医院住院确诊的77例ABPA患者的临床资料。结果77例ABPA患者中,男38例,女39例,平均年龄(41.8±18.3)岁。74例(96%)合并支气管哮喘,3例(4%)合并肺囊性纤维化。主要症状有咳嗽(100%)、咳痰(97%)、喘息(86%)、痰栓(25%)、痰中带血(18%)、咯血(9%)、胸痛(9%)；发热(47%)、体重下降(30%)、盗汗(12%)。实验检查主要发现血嗜酸性粒细胞升高(87%)、抗曲菌特异性IgE升高(89%)、特异性IgG升高(57%)、曲菌抗原皮试阳性(88%)。肺功能：阻塞性通气功能障碍(66%)、弥散功能障碍(65%)、舒张实验阳性(60%)。胸部CT 72例,中心型支气管扩张(81%)、斑片条索影(79%)、胸膜增厚(49%)、纵隔及肺门多发肿大淋巴结(35%)、结节影(25%)、痰栓征(21%)、游走斑片影(35%)。44例(58%)患者诊断ABPA前误诊为肺结核、肺炎、肺脓肿、肺癌、自身免疫性等疾病。结论：ABPA极易误诊,当支气管哮喘或肺囊性纤维化患者出现喘息、痰栓、血嗜酸性粒细胞增高、中心型支气管扩张、肺内游走斑片影的应高度警惕合并该病。
【关键词】：支气管哮喘 IRAK-M T细胞亚群 树突状细胞 巨噬细胞 变应性支气管肺曲菌病 临床特征 诊断
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R519.8;R562.25
【目录】：

• 缩写词6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-16
• 第一部分：IRAK-M在哮喘中的免疫调节作用16-87
• 一. 引言16-17
• 二、实验方法材料17-54
• 1 材料17-19
• 1.1 实验动物17
• 1.2 主要试剂17-18
• 1.3 主要仪器18-19
• 1.4 主要溶液配置19
• 2 实验方法19-52
• 2.1 哮喘模型20-44
• 2.1.1 哮喘模型的建立20-21
• 2.1.2 气道反应性测定21-22
• 2.1.3 支气管肺泡灌洗收集及计数染色22
• 2.1.4 标本收集22-23
• 2.1.5 支气管肺泡灌洗多因子检测23-31
• 2.1.6 血清ELISA检测31
• 2.1.7 肺组织病理31-34
• 2.1.8 肺组织免疫组化34-36
• 2.1.9 纵隔淋巴细胞及计数36
• 2.1.10 肺单个核细胞获取及计数36-37
• 2.1.11 脾单个核细胞获取37-38
• 2.1.12 流式细胞术检测及分析38-41
• 2.1.13 RT-PCR41-44
• 2.1.14 肺组织匀浆上清提取44
• 2.2 细胞实验44-51
• 2.2.1 磁珠分离naive CD4+T细胞44-45
• 2.2.2 naive CD4+T细胞及脾细胞增殖实验45-46
• 2.2.3 naive CD4+T细胞诱导分化实验46-48
• 2.2.4 骨髓来源树突状细胞培养48
• 2.2.5 磁珠纯化骨髓来源树突状细胞48-50
• 2.2.6 骨髓来源树突状细胞诱导分化实验50
• 2.2.7 巨噬细胞吞噬实验50-51
• 2.2.8 混合培养实验51
• 2.3 巨噬细胞移植实验51-52
• 2.3.1 哮喘模型建立51-52
• 2.3.2. 样本收集及检测52
• 2.4 DC细胞移植实验52
• 3 统计学分析52-54
• 三、结果54-80
• 四、讨论80-83
• 五、总结83-84
• 参考文献84-87
• 第二部分：变应性支气管肺曲菌病患者临床特征分析87-104
• 一. 引言87-88
• 二、资料方法88-90
• 三、结果90-100
• 四、讨论100-102
• 五、总结102-103
• 参考文献103-104
• 综述一104-113
• 参考文献110-113
• 综述二113-121
• 参考文献119-121
• 致谢121-122

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1 张明强;IRAK-M在哮喘中的免疫调节作用及变应性支气管肺曲菌病患者临床特征分析[D];北京协和医学院;2016年

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本文编号：831745