干扰MH-S细胞株β-catenin表达的shRNA慢病毒载体构建及功能鉴定

发布时间：2017-09-19 07:13

  本文关键词：干扰MH-S细胞株β-catenin表达的shRNA慢病毒载体构建及功能鉴定

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【摘要】：目的针对β-catenin基因构建短发夹RNA(short harpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,鉴定β-catenin基因干扰效率,并检测其对小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S功能的影响。方法设计并构建5个针对β-catenin基因的shRNA干扰载体。实验分为空白细胞对照组(MH-S)、二氧化硅诱导组(silica)、病毒干扰组(silica+LV-shβ-catenin)、病毒对照组(silica+LV-shβ-catenin-NC)4组,realtime-PCR检测各组细胞β-catenin基因mRNA的表达水平,ELISA检测各组细胞培养上清中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的分泌情况。结果二氧化硅诱导后,与silica组和silica+LV-shβ-catenin组比较,silica+LV-shβ-catenin-NC组β-catenin mRNA的表达率降低(均有P0.05),silica+LVshβ-catenin-NC组TGF-β1、IL-6和TNF-α的分泌减少(均有P0.05)。结论构建的shRNA慢病毒载体能够有效抑制经二氧化硅诱导的MH-S细胞株β-catenin基因表达,并抑制TGF-β1、IL-6和TNF-α的分泌,为体内矽肺纤维化的分子机制研究奠定基础。
【作者单位】： 天津市疾病预防控制中心职业病预防控制所;天津医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系;
【关键词】： RNA 慢病毒属 细胞因子类
【基金】：国家自然科学基金(81102106) 中国博士后科学基金(2014M560189) 天津市自然科学基金(15JCQNJC10500)
【分类号】：R135.2
【正文快照】： (Chin J Dis Control Prev 2015,19(9):922-925)矽肺是目前我国发病率最高的职业病之一,严重危害我国工人健康。目前尚无治疗矽肺纤维化的有效方法。研究表明,Wnt/β-catenin信号转导途径与肺纤维化的形成密切相关[1],而β-catenin是经典Wnt/β-catenin信号转导途径中最重要的

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