全氟化碳对肺间充质干细胞体外相关生物学特性的影响

发布时间：2017-09-26 21:34

  本文关键词：全氟化碳对肺间充质干细胞体外相关生物学特性的影响

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【摘要】：目的：肺间充质干细胞为肺间充质来源的内源性成体干细胞,能够自我复制并分化成肺组织中的各种间充质及非间充质细胞,参与肺损伤的修复过程,是急性肺损伤及各种肺部疾病治疗的潜在靶点。全氟化碳为肺液体通气治疗的主要介质,具有高携氧性及生物抗炎效应,但其治疗急性肺损伤的机制仍不明确,本研究拟从全氟化碳对肺间充质干细胞生物学特性的影响方面探讨全氟化碳治疗急性肺损伤的作用机制。方法：(1)采用胶原蛋白酶消化法从大鼠肺脏中提取LMSC,并对所提取细胞的表面标志抗原及体外诱导分化能力进行鉴定。(2)将细胞分为LMSC组和PFC处理组,分别绘制两组生长曲线并检测细胞周期以观察PFC对LMSC体外生长增殖的影响。(3)将细胞分为对照组、SAGM诱导分化组和SAGM+PFC组,诱导LMSC向肺上皮细胞分化,分别采用RT-qPCR及免疫荧光检测SPC和AQP5的mRNA和蛋白表达,观察PFC对LMSC向肺泡上皮分化能力的影响。(4)将细胞分为对照组、LPS(200ng/ml)组、PFC组以及LPS(200ng/ml)+PFC组,分别干预24h后,采用RT-qPCR检测细胞IL-1ra、KGF、VEGF、HGF、TSG-6、ANG-1和TGF-β的mRNA表达,采用ELISA法检测细胞培养上清液中HGF的分泌量,以观察PFC对LMSC旁分泌能力的影响。结果：(1)从大鼠肺脏组织中提取的细胞体外培养贴壁,免疫表型为CD29+/CD54+/CD90+/CD45-/CD11b-/CD31-,能够诱导向成脂、成骨和成软骨方向分化,可以鉴定为LMSC。(2) LMSC的生长曲线及细胞周期检测均符合干细胞特点,PFG组生长曲线及细胞周期均较LMSC组无明显差异。(3)诱导分化组及PFC组均可见SPC和AQP5表达,对照组免疫荧光基本无SPC和AOP5表达。前两组SPC和AQP5的平均光密度值及mRNA相对表达量均显著高于对照组(P0.01)。诱导分化组SPC平均光密度值及mRNA相对表达量均高于PFC组(P0.05),但两组之间AQP5的平均光密度值及mRNA相对表达量无统计学差异。(4)LPS组IL-1ra、KGF、VEGF和TSG-6 mRNA表达高于对照组(p0.05)。LPS+PFC组IL-1ra、KGF及VEGF mRNA表达高于LPS组(p0.05)。细胞培养上清中LPS组HGF含量明显高于对照组(p0.01),LPS+PFC组则高于LPS组(p0.05)。PFC组和对照组之间所有旁分泌因子表达均无差异。结论：(1)利用胶原酶消化法能成功提取LMSC。(2)PFC不影响LMSC体外生长增殖。 (3)PFC抑制LMSC向Ⅱ型上皮细胞分化,不影响LMSC向Ⅰ型上皮细胞分化。(4)LPS能刺激LMSC分泌IL-1ra、KGF、VEGF、HGF和TSG。PFC能促进受LPS刺激的LMSC分泌IL-1ra、KGF、VEGF及HGF,对未受LPS刺激的LMSC则无促进作用。
【关键词】：肺间充质干细胞 全氟化碳 增殖 分化 旁分泌
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R56
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 第一部分 LMSC的分离培养与鉴定14-24
• 材料与方法14-19
• 结果19-21
• 讨论21-24
• 第二部分 PFC对LMSC体外生物学特性的影响24-47
• 第一节 PFC对LMSC生长增殖的影响24-28
• 材料与方法24-25
• 结果25-27
• 讨论27-28
• 第二节 PFC对LMSC分化能力的影响28-38
• 材料与方法28-33
• 结果33-37
• 讨论37-38
• 第三节 PFC对LMSC旁分泌能力的影响38-47
• 材料与方法38-41
• 结果41-45
• 讨论45-47
• 全文结论47-48
• 参考文献48-56
• 文献综述56-64
• 参考文献59-64
• 攻读学位期间发表文章情况64-65
• 致谢65

【共引文献】

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本文编号：925860