机械牵张预处理对过度牵张所致肺泡上皮细胞损伤的影响及相关机制的研究

发布时间：2017-09-28 16:34

  本文关键词：机械牵张预处理对过度牵张所致肺泡上皮细胞损伤的影响及相关机制的研究

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【摘要】：第一部分过度机械牵张对肺泡上皮细胞凋亡及细胞骨架的影响 目的：探讨过度机械牵张对肺泡上皮细胞凋亡及细胞骨架的影响,阐明其相关机制。 方法：A549细胞株培养鉴定后分组,每组5份,施以相应的处理。实验分为空白对照组(C组)和过度牵张组(S组),S组：予以A549细胞20%的机械牵张2h、4h、6h和8h,分别记为S2组、S4组、S6组和S8组。收集细胞并测定下列指标：流式细胞仪检测细胞凋亡；荧光显微镜下观察F-actin改变；RT-PCR测定RhoA和RacmRNA表达。 结果：与C组比较,S组随牵张时间延长凋亡率增加(P0.05)。F-actin染色结果显示：与C组比较,随着过度牵张时间的延长细胞骨架破坏加重,S8组尤为明显。RT-PCR检测结果显示：与C组比较,Rac mRNA表达进行性降低(P0.01); RhoA mRNA表达在6h、8h升高,6h时达峰值。 结论：随着过度牵张时间的延长,细胞凋亡增加,细胞骨架破坏明显,其机制可能与上调RhoA mRNA表达、抑制Rac mRNA表达密切相关。 第二部分机械牵张预处理对过度牵张所致肺泡上皮细胞损伤的影响及相关机制的研究 目的：探讨机械牵张预处理对过度牵张所致肺泡上皮细胞凋亡及细胞骨架的影响,阐明其可能的相关机制。 方法：A549细胞株培养鉴定后分组,每组5份,施以相应的处理。实验分为对照组(C组)、过度牵张6h组(S6组)和预牵张组(P-S组),S6组：予以上皮细胞20%的机械牵张6h,记为S6组；P-S组：预先给予5%机械牵张15min、30min、60min、120min之后将牵张幅度调整为20%牵张6h,记为P15-S6组、P30-S6组、P60-S6组和P120-S6组。所有组别均行流式细胞仪检测细胞凋亡；荧光显微镜下观察F-actin改变；RT-PCR测定RhoA和Rac mRNA表达。 结果：与S6组比较,预处理30、60、120min时P-S6组细胞凋亡率下降(P0.05),预牵张60min时细胞凋亡率最低。F-actin染色结果显示：与S6组比较,P-S6组肌丝重排、断裂减轻,周边肌动蛋白丝带清晰,以预牵张60min时更优。RT-PCR检测结果显示：与S6组比较,P-S6组RhoA mRNA表达均明显下降(P0.01)；Rac-1mRNA表达仅在预处理30、60min时差异有统计学意义(P0.05)。 结论：给予5%机械牵张预处理可通过抑制RhoA mRNA表达而上调Rac-1mRNA表达,从而减轻20%过度牵张所致的肺泡上皮细胞凋亡及细胞骨架破坏。
【关键词】：机械牵张 细胞骨架 F-actin 上皮屏障 细胞凋亡
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.8
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要英文缩略词表10-11
• 前言11-15
• 第一部分 过度机械牵张对肺泡上皮细胞细胞损伤的影响15-29
• 材料和方法15-22
• 1.1 实验试剂15-16
• 1.2 实验仪器及设备16-17
• 1.3 细胞培养17
• 1.4 机械牵张17
• 1.5 实验分组17-18
• 1.6 检测项目与方法18-21
• 1.7 统计分析21-22
• 结果22-27
• 1.1 过度牵张对肺泡上皮细胞细胞凋亡的影响22
• 1.2 过度牵张对肺泡上皮细胞肌动蛋白(F-ACTIN)的影响22
• 1.3 过度牵张对肺泡上皮细胞RHOA和RAC-1 MRNA表达影响22-27
• 讨论27-29
• 第二部分 机械牵张预处理对过度牵张所致肺泡上皮细胞损伤的影响及相关机制研究29-43
• 材料和方法29-36
• 1.1 实验试剂29-30
• 1.2 实验仪器及设备30-31
• 1.3 细胞培养31
• 1.4 机械牵张31
• 1.5 实验分组31-32
• 1.6 检测项目与方法32-35
• 1.7 统计分析35-36
• 结果36-41
• 1.1 预牵张对过度牵张所致肺泡上皮细胞凋亡的影响36
• 1.2 预牵张对过度牵张所致肺泡上皮细胞肌动蛋白(F-ACTIN)的影响36
• 1.3 预牵张对过度牵张所致肺泡上皮细胞RHOA和RAC MRNA表达的影响36-41
• 讨论41-43
• 第三部分 结论43-44
• 参考文献44-48
• 综述48-58
• 参考文献54-58
• 攻读学位期间主要的研究成果58-59
• 附件59-65
• 致谢65

【共引文献】

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本文编号：936963