Galangin对哮喘气道重塑的影响及其机制研究

发布时间：2017-10-06 08:18

  本文关键词：Galangin对哮喘气道重塑的影响及其机制研究

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【摘要】：第一部分Galangin对慢性哮喘小鼠模型气道重塑的影响及机制研究【目的】探讨Galangin对鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的慢性哮喘小鼠模型气道重塑的影响及机制。【方法】48只SPF级BALB/c小鼠随机分为对照组(control)、哮喘组(OVA)、低剂量Galangin(0.1 mg/kg)组(OVA+GL)、高剂量Galangin(0.5 mg/kg)组(OVA+GH)、地塞米松(1 mg/kg)组(OVA+DEX)和溶剂对照组(OVA+DMSO),每组8只。建立OVA诱导的慢性哮喘小鼠模型,于第0、7、14天腹腔内注射OVA+氢氧化铝凝胶致敏,自第16天起连续8周雾化激发,每周3次,每次30分钟。末次激发24小时后,取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage,BALF)离心后计数总细胞数及分类细胞计数;酶联免疫吸附测定法分别检测各组小鼠血清中OVA特异性Ig E和BALF中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平;取肺组织病理切片行苏木精-伊红(haematoxylin and eosin staining,HE)染色观察肺组织气管及血管周围炎性细胞浸润;过碘酸-雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色观察杯状细胞增生及粘液分泌;Masson染色观察纤维增生;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin alpha chain,α-SMA)及基质金属蛋白酶(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)蛋白的水平;蛋白质印迹法(western blot)检测肺组织中α-SMA、MMP-9及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的表达。【结果】造模组(OVA组)小鼠可见明显的气道炎症反应和气道重塑的病理表现。气道及血管旁可见大量炎症细胞浸润;BALF中总细胞计数、嗜酸性粒细胞数、巨噬细胞数及中性粒细胞数均显著增加(P0.05);OVA+GH组及OVA+DEX组给药后显著抑制炎症细胞的浸润;降低BALF中的总细胞数、嗜酸性粒细胞数、巨噬细胞数及中性粒细胞数(P0.05);造模组小鼠管腔内可见粘液分泌增多、杯状细胞增生,胶原沉积和纤维化(P0.05);而OVA+GH组及OVA+DEX组给药后杯状细胞增生及粘液分泌明显减少,胶原沉积和纤维化的程度也明显减轻(P0.05);造模组小鼠肺组织中α-SMA表达增加(P0.05);而OVA+GH组给药后α-SMA表达下降(P0.05);造模组小鼠BALF中TGF-β1水平较正常组升高,VEGF和MMP-9蛋白表达上调(P0.05);OVA+GH组及OVA+DEX组给药后降低BALF中TGF-β1水平,抑制VEGF和MMP-9蛋白在肺组织中的表达(P0.05)。【结论】Galangin可抑制OVA致敏的哮喘模型小鼠的慢性气道炎症和气道重塑,推测其可能通过降低TGF-β1的水平、抑制VEGF和MMP-9的表达抑制气道重塑,为哮喘的预防和治疗提供了新的思路。第二部分Galangin对TGF-β1诱导的气道平滑肌增殖的影响及机制研究【目的】探讨Galangin对TGF-β1诱导的人气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)增殖的影响及机制。【方法】体外培养原代人ASMCs。采用细胞计数(cell counting kit-8,CCK-8)法检测不同浓度TGF-β1对人ASMC增殖的影响;CCK-8法检测不同浓度Galangin对人ASMC活性的影响;CCK-8法和EDU法分别检测Galangin对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人ASMC增殖的影响;流式细胞术及共聚焦显微镜形态学分析检测10μM Galangin、1 m M N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)及10 m M NAC对TGF-β1诱导的ASMCs产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响;蛋白质印迹法(western blot)检测10μM Galangin对TGF-β1诱导的ASMCs中氧化酶(NADPH oxidase 4,Nox4)及抗氧化酶(超氧化物歧化酶[superoxide dismutase,SOD]和catalase)的表达,并检测相关通路(ERK,JNK及Akt)蛋白的表达。【结果】CCK-8法结果发现1 ng/m L TGF-β1可诱导人ASMC增殖(P0.05);10μM Galangin给药24和72小时后ASMC的细胞活力分别为90%和86%;10μM Galangin可抑制TGF-β1诱导的人ASMC增殖,将增殖率从124%±8%降至101%±2%(P0.05),而0.1μM和1μM Galangin抑制增殖的效应差异无统计学意义(P0.05);EDU法检测10μM Galangin抑制TGF-β1对人ASMCs的促增殖作用与CCK-8法的结果一致(P0.05);此外,1 ng/m L TGF-β1可诱导人ASMCs产生ROS增多(P0.05);10μM Galangin、1 m M NAC和10 m M NAC均能有效抑制ROS产生,降低ROS水平至溶剂对照组的79%,82%及62%,部分逆转氧化/抗氧化失衡(P0.05);10μM Galangin还能降低TGF-β1诱导的人ASMCs中p-JNK、p-ERK、p-Akt的磷酸化水平,抑制MAPK等通路的激活(P0.05)。【结论】Galangin可能通过TGF-ROS-MAPK通路,抑制TGF-β1诱导的人ASMC增殖,从而发挥抗重塑作用。
【关键词】：哮喘 Galangin 气道重塑 TGF-β1 哮喘 Galangin ASMCs TGF-β1 ROS
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 主要英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 第一部分 Galangin对慢性哮喘小鼠模型气道重塑的影响及机制研究13-38
• 前言13-15
• 材料与方法15-27
• 结果27-32
• 讨论32-34
• 参考文献34-38
• 第二部分 Galangin对TGF-β1 诱导的人气道平滑肌细胞增殖的影响及机制研究38-56
• 前言38-39
• 材料与方法39-47
• 结果47-50
• 讨论50-52
• 小结52
• 参考文献52-56
• 综述 氧化应激对支气管哮喘气道重塑的影响56-66
• 参考文献62-66
• 攻读学位期间发表文章情况66-67
• 致谢67

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本文编号：981717