HepG2细胞表达蛋白HCVC体外活化肝星状细胞的研究

发布时间：2017-10-09 17:19

  本文关键词：HepG2细胞表达蛋白HCVC体外活化肝星状细胞的研究

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【摘要】：目的观察HCV核心蛋白对肝星状细胞活化及合成细胞外基质的影响,为进一步研究HCV核心蛋白的致肝纤维化机制提供实验依据。方法采用双抗体夹心ELISA检测HepG2-HCV-C细胞株培养液中TGF-β1的表达。用HepG2-HCV-C和HepG2两株细胞培养5d的上清液培养人肝星状细胞系LX-2细胞,同时用DMEM培养LX-2细胞作对照,分别制备细胞爬片,采用免疫细胞化学染色(ICC)法检测LX-2细胞中人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN)的表达;采用双抗体夹心ELISA检测LX-2细胞1~6d培养上清液中人ColⅣ、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和人层粘连蛋白(LN)的表达。所有数据采用SPSS11.0统计软件进行统计分析。结果双抗体夹心ELISA检测HepG2-HCV-C细胞1~6d培养液中的TGF-β1量为(110.00±11.45)pg/ml~(935.00±21.36)pg/ml,HepG2细胞为0~(124.16±11.81)pg/ml,差异有统计学意义(F=21984.81,P0.01)。ICC检测用HepG2-HCV-C上清液培养的LX-2细胞α-SMA、ColⅣ、CTGF和FN均为弥漫阳性,细胞染成深褐色;用HepG2培养的LX-2细胞呈局灶性棕黄色,DMEM培养的LX-2细胞染色阴性。ELISA检测LX-2(HepG2-HCV-C)组ColⅣ、HA、LN和PⅢNP的值均显著高于LX-2(HepG2)组和LX-2(DMEM)组(均P0.05或P0.01)。结论 HCV C蛋白能上调TGF-βl的表达,表达C蛋白的细胞系能促进LX-2细胞多种细胞外基质(ECM)的合成。提示HCV C蛋白可能通过活化肝星状细胞,参与肝纤维化形成中多种ECM合成的调控。
【作者单位】： 青岛市妇女儿童医院新筛实验室;中山大学中山医学院;
【关键词】： 丙型肝炎病毒 核心蛋白 HepG细胞 LX-细胞 活化
【基金】：广东省科技计划项目(No.2007B030702015)
【分类号】：R373.21
【正文快照】： 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是慢性肝炎的主要致病因子之一,目前全世界约有1.7亿人感染,约占全球人口的3%。HCV感染常可持续存在,引起肝脏慢性炎症,进而导致肝脏纤维化、肝硬化及肝癌等严重后果。肝纤维化的特征是以胶原为主的细胞外基质(ECM)各成份因合成增多和降解

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本文编号：1001429