构建p53双荧光报告载体及其功能验证
本文关键词：构建p53双荧光报告载体及其功能验证
【摘要】：目的:构建p53双荧光报告载体,验证其能否模拟野生型p53的生物学活性并适用于高通量筛选。方法:用PCR在p53和萤火虫荧光素酶的开放阅读框两端引入酶切位点并移除p53的终止密码和萤火虫荧光素酶的起始密码,然后将二者插入到由内部核糖体进入位点引导的海肾荧光素酶的上游,从而构建出一个能表达P53萤火虫荧光素融合蛋白的p53FL/IRES/RL双荧光报告载体。转染该报告载体后,检测被表达的P53荧光素融合蛋白是否被MDM2降解、该融合蛋白的亚细胞定位和它对p53特异性启动子的诱导。结果:成功构建出p53双荧光报告载体。该载体在宿主细胞内表达的P53荧光素融合蛋白能被MDM2降解;主要分布于细胞核;具有野生型p53的转录活性。结论:新构建的p53双荧光报告载体p53FL/IRES/RL能有效模拟野生型p53的功能,适用于高通量筛选调节P53蛋白含量的药物、基因或化合物。
【作者单位】： 中南大学湘雅三医院泌尿外科;
【关键词】： 高通量筛选 p 野生型 双荧光载体 转染
【分类号】：R341
【正文快照】： 自从科学家在1979年提出抑瘤蛋白P53在肿瘤发病学中有重要作用以来,以P53及其调节蛋白为靶位点的新药开发一直是生物医学的研究重点和热点之一。例如,2004年2月出版的《Science》杂志刊登了坚果素(nutlins)能够通过阻止MDM2和P53的结合、抑制MDM2介导的P53降解、上调P53抑瘤活
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本文编号：1003440
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