细粒棘球绦虫重组BCG-EgG1Y162菌株的构建和表达

发布时间：2017-10-10 03:10

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【摘要】：目的构建和表达细粒棘球绦虫重组卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162。方法通过基因工程技术将细粒棘球绦虫抗原EgG1Y162的编码基因与大肠埃希菌(E.coli)-分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV361重组,并转化E.coli后进行扩增。重组质粒pMV-EgG1Y162经PCR和双酶切鉴定后,进行测序。将鉴定正确的rpMV-EgG1Y162通过电穿孔技术转化至感受态BCG菌株中,构建rBCG-EgG1Y162。经PCR和双酶切鉴定正确后,扩增培养2周,并于45℃放置30 min,诱导目的蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达情况,并以兔抗原核表达重组蛋白EgG1Y162血清为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果重组质粒rpMV-EgG1Y162经PCR扩增和双酶切后,均获得约360 bp的EgG1Y162目的基因片段,与预期片段长度一致,测序结果表明插入序列正确。将其通过电穿孔转化BCG菌株后,rBCG-EgG1Y162生长良好,经酶切和PCR鉴定正确。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的表达产物的相对分子质量(Mr)约为71 000。结论构建和表达了细粒棘球绦虫rBCG-EgG1Y162菌株。
【作者单位】： 新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地 新疆医科大学第一附属医院;新疆医科大学基础医学院;
【关键词】： 细粒棘球绦虫 EgGY 重组卡介苗
【基金】：国家自然科学基金(No.31000411,81160378) 新疆维吾尔自治区高校科研计划(No.XJEDU2010S25)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 细粒棘球蚴病是由细粒棘球绦虫幼虫感染中间宿主引起的一种地方性和自然疫源性的人兽共患寄生虫病[1]。疫苗的研制有利于对该病流行的控制[2]。重组卡介苗(BCG)是借助基因工程学技术对BCG基因进行合理的重组改造,并利用BCG的活疫苗载体的特点,构建单次免疫诱导持久作用的新型

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本文编号：1003980