Ezrin多克隆抗体制作及应用

发布时间：2017-10-11 05:02

  本文关键词：Ezrin多克隆抗体制作及应用

  更多相关文章： 原核表达纯化 Ezrin蛋白 动物免疫 抗血清 抗体鉴定

【摘要】：构建Ezrin原核重组表达载体pET-28a(+)-ezrin,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得Ezrin蛋白,将经镍柱亲和层析纯化后的蛋白分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠(KM),获得抗血清,采用ELISA和Western blotting,免疫荧光测定其效价和特异性。ELISA对抗血清进行效价测定表明抗血清可与抗原发生特异性免疫反应;通过Western blotting对抗血清进行鉴定表明抗血清可以识别几种细胞株内的特异性条带,其相对分子量为82 kD,与预测分子量相符;免疫荧光试验表明抗血清可以识别细胞内的Ezrin蛋白,且定位情况与文献报道相符。最后通过protein G对抗血清进行了纯化。结果表明用该方法制备的Ezrin多克隆抗体有较高的特异性和灵敏度。
【作者单位】： 清华大学生命科学学院;清华大学深圳研究生院生命与健康学部生物医药研究中心和基因与抗体治疗重点实验室;
【关键词】： 原核表达纯化 Ezrin蛋白 动物免疫 抗血清 抗体鉴定
【基金】：国家自然科学基金项目(30570960,30900749) 深圳市重点实验室建设与提升计划
【分类号】：R392
【正文快照】： 埃兹蛋白(Ezrin)是一种重要的膜-细胞骨架连接分子,属于ERM家族(Ezrin,Radixin,Moesin)中的一员。ERM家族蛋白的同源性主要体现在他们都在N-末端有一个同源性很高的FERM功能域(FERM domain),以及在C-末端的不同氨基酸位置上有一个关键的、与其激活有关的苏氨酸磷酸化位点,FER

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张小兵;邸禄芹;吴萌;闫静辉;;单克隆抗体与多克隆抗体配对ELISA方法比较[J];生物技术通报;2009年11期

2 陈卓;刘家驹;毕亮;李向阳;胡德禹;于丹丹;王贞超;杨松;宋宝安;;NPR1多肽抗体的制备和应用[J];生物技术通报;2012年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 裴国顺;冯若飞;侯兰新;;日本脑炎诊断技术研究进展[J];动物医学进展;2010年09期

2 李超英;姜金庆;李凤云;杨金明;刘明成;吴世秀;;睾酮单克隆杂交瘤细胞株的筛选及性能鉴定[J];贵州农业科学;2012年06期

3 毕亮;李为华;陈卓;;一种新型手性含苯并噻唑基团的β-氨基酸衍生物诱导烟草抗TMV作用的研究[J];科技信息;2012年19期

4 陈卓;于丹丹;郭勤;刘家驹;王贞超;李向阳;毕亮;胡德禹;杨松;宋宝安;;烟草HrBP的研究与应用[J];生物技术通报;2012年09期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张立静;TEM1型β-内酰胺酶免疫胶体金层析检测方法的建立[D];河北农业大学;2011年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王新禾，张月娥，张锦生，，许祖德，张秀荣;人Ⅰ、Ⅲ型胶原的提取及其抗血清的制备[J];上海医科大学学报;1994年06期

2 邱世翠,高美华;利用兔抗人血清替代AFP抗血清作模拟试验[J];滨州医学院学报;1997年06期

3 黎万玲,周镜然,王更银,白云;微量免疫法制备小鼠抗人补体C9抗血清[J];免疫学杂志;2002年04期

4 晏晓军;段志贵;周远峰;王贤纯;梁宋平;;间斑寇蛛L.tredecimguttatus粗毒抗血清制备及其活性分析[J];蛛形学报;2006年02期

5 陈艳秋;彭智;龙军;张国民;吕U

本文编号：1010601